Правила определения группы крови по системе АВО

Процедура определения групп крови по системе АВО заключается в выявлении антигенов А и В в эритроцитах с помощью стандартных антител и использованием агглютининов в плазме или сыворотке анализируемой крови стандартными эритроцитами. Методика разработана в начале XX века и до сих пор активно применяется в медицине. Определение антигенов А и В осуществляется благодаря цоликлонам анти-А и анти-В.

Основные понятия

У доноров всегда определяются не только антигены в эритроцитах, но и агглютинины в сыворотке (плазме) с применением стандартных эритроцитов. В качестве биоматериала используется венозная кровь. Перед исследованием необходимо отказаться от жирной пищи за сутки до анализа и не курить за полчаса до сдачи теста. Группы крови определяют дважды: сначала в лечебном отделении, где заготавливается материал, а затем подтверждают исследованием в лаборатории.

Определение групп крови по системе АВО является основным тестом, который используется в трансфузиологии. Также подобная система групп крови есть у некоторых животных, например у шимпанзе, горилл и бонобо.

История открытия

В науке существует общепринятое мнение о том, что методика определения групп крови по системе АВО была выявлена впервые Карлом Ландштейнером, австрийским учёным, в 1900 году. Тогда он описал в своём труде три типа антигенов. За это через тридцать лет ему была присуждена Нобелевская премия по медицине и физиологии. Из-за того, что между учёными раньше не было тесных связей, позже установили, что чешский врач-серолог Ян Янский независимо от изысканий К. Ландштейнера впервые описал четыре группы крови человека, но его исследования были не известны широкой аудитории. В настоящее время именно классификация, разработанная Я. Янским, применяется в России и республиках бывшего СССР. В США У. Л. Мосс создал свою похожую работу в 1910 г.

Методика определения групп крови по системе АВО с помощью цоликлонов

Группа крови должна определяться в помещении с хорошим освещением с соблюдением диапазона температуры от 15 до 25 градусов Цельсия, так как отклонения от этой нормы могут повлиять на результаты исследования. На пластинке или тарелке пишутся инициалы и фамилия пациента. Слева направо или по кругу наносят стандартные обозначения групп (О(I), A(II), В(III)). Под ними размещают по капле соответствующие сыворотки отдельными пипетками для каждого вида. Затем к ним добавляется кровь пациента. Материал для исследования берется из мочки уха или пальца. Этого требует техника определения группы крови по системе АВО.

Правомерно также использование эритроцитов, находящихся в пробирке после того, как образовался сгусток. Нужно, чтобы количество сыворотки было больше количества добавленной крови в десять раз. После этого капли перемешиваются стеклянными палочками (отдельно для каждой). В течение пяти минут, аккуратно покачивая пластинку, смотрят за появлением реакции гемагглютинации. Она обнаруживается в том, что появляются маленькие красные комочки, сливающиеся затем в более крупные. Сыворотка в это время практически полностью теряет цвет.

Для того чтобы устранить ложную гемагглютинацию простого склеивания эритроцитов, нужно через три минуты добавить одну каплю физиологического раствора и проверить, сохраняется ли агглютинация. Если да, то она является истинной. Все, определение групп крови по системе АВО на этом завершено.

Толкование результатов

В результате могут наблюдаться четыре реакции:

  • не происходит агглютинация ни с одной из сывороток – первая группа О(I);
  • реакция проявилась с сыворотками I(ab) и III(a) – вторая группа А(II);
  • агглютинация наступает с сыворотками I(ab) и II(b) – третья группа В(III);
  • если реакция происходит с тремя сыворотками, нужно провести дополнительную процедуру с реактивами группы АВ(IV), которые являются стандартными; если агглютинация в такой капле отсутствует, можно считать, что это 4-я группа крови АВ(IV).

Экспресс-метод для резус-фактора

Методика определения групп крови по системе АВО предполагает одновременное выявление резус-фактора (Rh).

Поверхность пластинки предварительно смачивают и пишут на ней «контрольная сыворотка» и «сыворотка антирезус». Затем под надписями располагают одну-две капли нужных реактивов и добавляют к ним анализируемый материал. Для этого также можно использовать кровь из пальца (в таком же количестве, как и объём сыворотки) или эритроциты, оставшиеся на дне пробирки после появления сгустка (половина объёма сыворотки). Выбор материала на конечный результат не влияет. Затем кровь и сыворотка перемешиваются сухой стеклянной палочкой, после чего в течение пяти минут ожидают наступления реакции. Для того чтобы устранить ложные показания, через три-четыре минуты добавляют изотонический раствор натрия хлорида (всего несколько капель). Определение группы крови по системе АВО и Rh проводится очень часто.

Если агглютинация эритроцитов в капле с сывороткой происходит, это указывает на положительный резус крови. По статистике Rh+ встречается у 85 % населения планеты. Отсутствие её позволяет говорить о резус-отрицательной принадлежности. Если агглютинация появилась в контрольной сыворотке, значит она пришла в негодность. К сожалению, алгоритм определения группы крови по системе АВО не всегда срабатывает идеально.

Какие ошибки могут быть допущены при данной методике?

Неточности при определении принадлежности крови той или иной группе зависят от следующих причин:

  • Технических.
  • Биологической специфики исследуемой крови.
  • Неполноценного характера стандартных сывороток и эритроцитов.

Технические ошибки

Возможные погрешности при определении группы крови системы АВО перекрестным способом:

  • Неправильно расположенные на пластинке сыворотки.
  • Неверные количественные пропорции материала.
  • Использование недостаточно чистых тарелок или пластинок, которые соприкасаются с кровью (каждая сыворотка должна набираться отдельной пипеткой, промывать которую нужно раствором хлорида натрия (в концентрации 0,9 %)).
  • Неверная запись анализируемого материала.
  • Несоблюдение времени, необходимого для наступления агглютинации, — спешить и учитывать реакцию до истечения пяти минут не следует, потому что в крови могут быть слабые агглютиногены. Передерживать также не стоит, потому что капли могут подсохнуть с краёв и привести к ложному заключению. Важно соблюдать правила определения группы крови по системе АВО.

Ошибки биологической специфики

Погрешности, связанные с биологической спецификой анализируемой крови, делятся на два типа.

  • Зависящие от особенностей эритроцитов.
  • Ошибки, обусловленные биологическими особенностями сыворотки.

Рассмотрим каждый вид более подробно.

Зависящие от особенностей эритроцитов

  • Поздняя агглютинация, объясняющаяся «слабыми» формами эритроцитов и антигенов. Для того чтобы избежать ошибок, определять группу крови доноров и реципиентов нужно с использованием стандартных эритроцитов. Индентифицировать агглютиноген А2 следует повторным исследованием с другими видами реагентов и другой посуды, увеличив время регистрации реакции.
  • «Панагглютинация» («аутоагглютинация») – умение крови проявлять одинаковую реакцию неспецифического характера со всеми сыворотками, в том числе с собственной. Через пять минут острота такой агглютинации слабеет, хотя должна усиливаться. Подобные случаи наблюдаются у онкобольных, обожжённых и др. В качестве контроля необходимо оценить проявление агглютинации анализируемых эритроцитов в стандартной сыворотке четвёртой группы и физрастворе. При «панагглютинации» группу крови определяют в результате тройного отмывания эритроцитов. Если оно не даёт нужного результата, стоит произвести повторный забор образца крови в согретую перед процедурой пробирку и поставить пробу в термоконтейнер, чтобы способствовать поддержанию температуры 37 градусов Цельсия и выше. Затем следует доставить в лабораторию, где сохраняется указанная выше температура и используются подогретые физиологический раствор, пластинка и реактивы.

  • Иногда эритроциты анализируемой крови располагаются как «монетные столбики», и их можно принять за агглютинаты. Если добавить две капли изотонического раствора и мягко покачать планшет, красные кровяные клетки занимают правильную позицию.
  • Неполная или смешанная агглютинация, встречающаяся у пациентов со второй, третьей и четвёртой группами в результате трансплантации костного мозга или в первые три месяца после переливания крови 0(I).

Обусловленные биологическими особенностями сыворотки

  • Во время рутинного тестирования в результате предыдущей сенсибилизации выявляются антитела иной специфичности. Нужно определить её и подобрать эритроциты без содержания антигена, к которому обнаружена иммунизация. Реципиенту нужно обязательно подбирать совместимую донорскую кровь индивидуально.
  • Отсутствуют антитела А и В, что наблюдается у новорожденных и больных, страдающих от угнетения гуморального иммунитета.
  • При образовании «монетных столбиков» аномальный результат нужно подтвердить, взяв стандартные эритроциты первой группы. Раствор хлорида натрия и покачивание планшета помогают дифференцировать настоящие агглютинаты и «монетные столбики».

Ошибки, связанные с применением неполноценных стандартных эритроцитов и сывороток

Слабые сыворотки с прошедшим сроком годности или имеющие титр меньше 1:32 способны зарождать слабую и позднюю агглютинацию. Применение таких реактивов недопустимо.

Использование негодных стандартных эритроцитов или сывороток, приготовленных в нестерильных условиях и законсервированных в недостаточной степени, приводит к появлению «бактериальной» агглютинации, имеющей неспецифическую природу.

Существует множество популярных предположений о группах крови системы АВО, появившихся непосредственно после её обнаружения в разных мировых культурах. Так, например, в 30-е годы прошлого столетия в Японии и некоторых других странах получила популярность теория, связывающая группу крови с тем или иным типом личности. Подобные теории популярны и на сегодняшний день.

Есть также мнение, что человек, имеющий группу А, подвержен тяжёлому похмелью, О связана с хорошими зубами, а группа А2 – с самым высоким уровнем IQ. Но научно такие утверждения не доказаны.

Мы рассмотрели определение групп крови по системе АВО с помощью стандартных сывороток.

Как определить группу крови человека по системе АВО, суть метода и его важность

Кровь человека – уникальная жидкость, объединяющая практически весь животный мир. Ее характеризуют и подразделяют по группам и резус-фактору. Как происходит определение группы крови по системе АВО? Каков алгоритм определения группы крови? Какой аппарат для этого применяется, и что требуется для проведения данной процедуры?

Особенности классификации

Чтобы понять, как определяются группы, важно разобраться, что такое наследование групп крови по системе АВО, и чем отличаются виды крови на молекулярном уровне.

На тип кровеносной жидкости не влияет:

  • возраст,
  • пол,
  • раса,
  • место проживания,
  • заболевания.

Групповые параметры крови не изменяется с течением времени и остается постоянной в течение всей жизни.

Группы крови отличаются содержанием разных агглютиногенов – элементов, расположенных на эритроцитарных клетках и агглютининов, которые присутствуют в плазме. У представителей одной группы присутствует один тип агглютиногена, у другой – других. В некоторых типах крови таких компонентов нет вообще.

Важно! Кровь – очень важная для организма жидкость. Она содержит 22 аутосомы от общего количества.

Агглютиногены бывают двух типов:

Ниже представлена таблица, описывающая их содержание в зависимости от группы:

  • первая группа – агглютиногенов нет,
  • вторая группа содержит агглютиногены А,
  • третья группа – агглютиногены В,
  • четвертая группа – агглютиногены А и В одновременно.

Учитывать группу крови и резус фактор жизненно необходимо при беременности, особенно, когда женщина резус-положительная, а мужчина – резус-отрицательный. В данном случае возникает иммунологическая несовместимость матери и плода, в результате чего последний отторгается.

Материнский организм реагирует на него, как на чужеродное явление. В результате ребенок погибает, рождается недоношенным или получает гемолитическую болезнь новорожденных – состояние, требующее длительного и сложного лечения. Такое явление происходит, если ребенок унаследовал положительный резус-фактор от отца, а мать резус-отрицательна. Однако при первой беременности изоиммунизация происходит далеко не всегда, поскольку антитела не успевают выработаться.

Еще этот фактор учитывают те, кто соглашается на переливание донорский крови. Иногда данную процедуру рекомендуют тем, кто перенес тяжелое кровотечение, например, при поражении крупной артерии, открытом переломе, тяжелых формах туберкулеза.

Донором называют того, кто сдает кровь для переливания ее другому человеку. Того, кто принимает этот биоматериал, называют реципиентом. Кровь с одинаковыми параметрами считается подходящей для донорства.

Почему нельзя ошибиться при исследовании

Нет механизма совмещения разных групп. Когда жидкости разных категорий смешиваются, происходит агглютинация, то есть процесс склеивания клеток между собой. Практически в 100% случаев результатом становится смерть пациента. В процессе агглютинации кровь слипается в комочки разных размеров. Циркуляция такой жидкости приводит к летальному исходу.

Люди с первой группой неспособны принимать иную кровь, кроме такой же. В ее составе нет никаких агглютиногенов, поэтому попадание этих веществ приводит к плаченым последствиям.

Агглютинация не происходит, когда к четвертой категории попадает кровь любого типа. В ней содержатся агглютиногены как А, так и В. Человек с четвертой группой крови считается идеальным реципиентом.

Почему важно точно определять резус-фактор

Однако важно не только определение группы крови по системе АВ0, но и выявление резус-фактора. Что это такое?

Резус-фактор – это генетическая особенность, не зависящая от человека. Тип крови закладывается еще при зачатии, он подразделяется на резус-положительный и резус-отрицательный. При развитии резус-конфликта организм матери вырабатывает антитела к биоматериалу ребенка, и происходит отторжение плода.

Подробнее о том, как наследуются типы кровеносной жидкости и резус-фактор, можно узнать, просмотрев видеосюжет:

Важно! Если при беременности возникнет резус-конфликт, это может закончиться летально для ребенка и вызвать осложнения в здоровье женщины.

Неважно, одноплодная беременность, или внутри женщины развиваются монозиготные близнецы. Процесс, вызванный резус-конфликтом, всегда приводит к печальным последствиям.

Определение группы крови по системе АВО важно проводить на ранних сроках беременности. Еще процедура показана тем, кто рискнул проводить переливание крови.

Процедура переливания крови, несовместимой по резус-фактору, приводит к гемолизу. В организме начинается распад эритроцитов. По сути, это иммунный ответ на проникновение в организм чужеродных клеток.

Выделяется гемолизин, то есть вещество, провоцирующее это разрушение. В итоге развивается тяжелая анемия. Если состояние вызвано переливанием, чаще всего процесс заканчивается летально.

Определение групп с помощью цоликлонов

Принцип определения группы крови цоликлонами заключается в несложной процедуре с использованием специальных реагентов. Антигенный и агглютининовый процесс достаточно яркий, чтобы сразу получить достоверную исчерпывающую информацию.

Важен порядок проведения данной манипуляции. Определение группы крови по системе АВ0 выполняется исключительно в лабораторных условиях. Для сохранения качества реагентов и самого биоматериала требуется охлаждение, которого невозможно достичь в домашних условиях.

Методика определения группы крови по системе АВО с помощью цоликлонов – пример современного способа диагностики и основа для будущих исследований и открытий. Процедуру можно проводить женщинам, ожидающим ребенка, независимо от того, какая неделя беременности протекает на данный момент.

Подготовка к манипуляциям

Как происходит наследование групп крови системы АВО, можно понять, если провести детальное изучение передачи физиологических признаков. Чтобы полученная характеристика крови была точной, требуется четко соблюдать все правила ее проведения. Обычно на такие манипуляции направляет врач-генетик. Исследование представляет собой анализ инвитро. Расшифровка необходима, ее тоже проводит врач.

Чтобы ни физиология, ни наследственность, ни стресс не сказались на результатах лабораторного исследования, важно четко соблюдать правила, как сдать такой анализа и условия, при которых он должен проводиться.

Чтобы правильно определить естественный генотип, важно соблюсти следующие условия:

  • в кабинете, где проводятся операции с реагентом, должна быть постоянная температура в диапазоне от 15-25 градусов,
  • все компоненты, используемые для определения системы групп крови, должны храниться в плотно закрытых банках,
  • чтобы стандартный метод исследования дал ясный результат, кабинет лаборатории должен быть хорошо освещен,
  • сыворотка и другие компоненты, используемые при процедуре, не должны содержать каких-то комков, или быть мутными.

Условия проведения процедуры могут быть соблюдены только в мед-учреждении. Требуется заранее подготовить инструменты, которые потребуются для определения типа в системе крови АВО:

  • специальные предметные стекла,
  • цоликлоны двух видов,
  • две разные пипетки,
  • стеклянные палочки для перемешивания реагентов,
  • шприц для манипуляций с кровью пациента,
  • вата,
  • стерильные салфетки,
  • спиртовой раствор,
  • жгут для манипуляций на венозных сосудах.

После того как все материалы и инструменты подготовлены к проведению процедуры, к ней можно приступить.

Проведение процедуры

Пациент, которому назначено переливание, или беременная женщина сдает кровь. Для этого забирают примерно 5 мл биоматериала. Такова норма для достоверного определения группы.

После этого на планшетку или специальную тарелку наносят по капле материала и по капле каждого реагента. Один реагент способен к агглютинации с антигенами, содержащимися во второй группе, а другой – к тем, что в третьей.

С помощью стеклянной палочки выполняется смешивание капли биоматериала с каждым реагентом в отдельности. Тот реагент, с которым произойдет агглютинация, и есть определитель группы крови. Этот нюанс имеет главное значение.

Такой множественный анализ расшифровывается так:

  • агглютинация реагента А – вторая группа,
  • агглютинация реагента В – третья группа,
  • агглютинация не произошла – первая группа,
  • агглютинация произошла с обоими реагентами – четвертая группа.

Важно! Если есть подозрение, что у человека четвертый тип, для достоверности образец проверяют на дополнительном анти-АВ цоликлоне.

Наглядно о проведении такого исследования в лаборатории рассказывается в видео:

Внимательный подход врача позволит точно определить группу и резус-фактор, что может сыграть важнейшую роль при планировании и вынашивании беременности. Так можно сохранить человеку жизнь и хорошее самочувствие, а некоторым парам подарить возможность иметь детей.

Из РЕШЕНИЯ совещания «Совершенствование лабораторной диагностики в службе крови»

Москва, 20-21 мая 2004 г.

XIII. Просить Центр крови Минздрава России опубликовать в Интернете по адресу http://www.transfusion.ru и разослать для обсуждения учреждениям службы крови подготовленный кафедрой гематологии, трансфузиологии и трансплантологии СПбГМУ им. акад. И.П.Павлова проект нормативного документа по проведению иммуногематологических исследований крови доноров и различных категорий реципиентов. Итоги обсуждения подвести 15-16 сентября 2004 года на совещании главных врачей.

Администрация сайта размещает полученный документ:

С целью обеспечения безопасности гемокомпонентной терапии и упорядочения проведения иммуногематологических исследований крови доноров и реципиентов

Утвердить следующий порядок выполнения иммуногематологических исследований в ЛПУ:

1. ПАЦИЕНТЫ

1.1. Всем пациентам, которым может потребоваться переливание крови или ее компонентов, должны быть планово выполнены необходимые иммуногематологические исследования. При проведении этих исследований все пациенты рассматриваются как реципиенты гемокомпонентов.

1.2. Группа крови по системе АВО первично определяется лечащим врачом простой реакцией (стандартными изогемагглютинирующими сыворотками или моноклональными антителами). Результат записывается в дневнике истории болезни и в направлении в подтверждающую лабораторию с обязательным указанием серий используемых реагентов, даты и фамилии врача, проводившего определение. В направлении указывается также: ФИО больного, возраст, отделение, N палаты, N истории болезни.

1.3. Вместе с направлением в подтверждающую лабораторию для выполнения иммуногематологических исследований передается промаркированный образец крови больного, заготовленный из вены в количестве не менее 5мл в чистую сухую пробирку или в пробирку с любым консервантом (стабилизатором). Срок хранения крови до исследования не должен превышать 48 часов при температуре +4°С.

1.4. В подтверждающей лаборатории врач, прошедший специальную подготовку по иммуногематологии, выполняет определение группы крови (АВО) перекрестным методом и резус (D) -принадлежности переданного образца крови больного, а также исследование на наличие аллоиммунных антител. Результаты определения фиксируются в рабочем журнале и в направлении на исследование. Выдача ответа подтверждающей лаборатории возможна лишь в случае совпадения результатов первичного и повторного определения. Если результаты не совпадают — проводят первичное и повторные исследования из вновь заготовленного образца крови больного.

1.5. После получения ответа из подтверждающей лаборатории лечащий врач выносит данные о групповой и резус-принадлежности на лицевую сторону истории болезни, проставив дату вынесения и свою подпись.

1.6. При экстренных показаниях к трансфузии гемокомпонентов и невозможности выполнения иммуногематологического исследования в подтверждающей лаборатории (ночное время, выходные и праздничные дни) исследования групповой и резус(D)-принадлежности проводятся дежурным врачом, при этом в обязательном порядке заготавливается образец крови больного и передается в подтверждающую лабораторию в часы ее работы.

Методы исследования:

Определение группы крови по системе АВО:

  • простая реакция с моноклональными антителами (изогемагглютинирующими сыворотками)
  • перекрестный метод — с моноклональными антителами (изогемагглютинирующими сыворотками) и стандартными эритроцитами А1, В, 0;
  • гелевый тест.

Наличие экстрагглютинина анти-А1 и/или слабой агглютинации при выявлении антигена А требует дополнительной верификации подгруппы антигена А (А2) с реагентами анти-А1 и анти-Н.

Определение резус-принадлежности (антиген D):

  • реакция прямой агглютинации с моноклональными антителами анти-D;
  • реакция с универсальным реагентом анти-резус (D);
  • реакция конглютинации с 10% раствором желатина;
  • непрямой антиглобулиновый тест;
  • гелевый тест.

При наличии слабых вариантов антигена D (Du), резус-принадлежность реципиента считается отрицательной. В таких случаях целесообразно выполнить полное типирование эритроцитов реципиента по основным антигенам систем Rh/K для точных рекомендаций по выбору гемокомпонентов для трансфузий.

1.7. Типирование антигенов эритроцитов систем
Скрининг антиэритроцитарных аллоантител.
Является обязательным для всех потенциальных реципиентов гемокомпонентов (вне зависимости от групповой и резус-принадлежности крови).

Методы исследования:

  • непрямой антиглобулиновый тест (гелевый тест) с панелью стандартных эритроцитов, состоящей не менее, чем из 3-х видов клеток, типированных по всем клинически значимым антигенам.

Обнаружение антиэритроцитарных аллоантител является показанием к назначению реципиенту индивидуального подбора при трансфузиях эритроцитсодержащих гемокомпонентов.

Идентификация антиэритроцитарных аллоантител.
Проводится в специализированных лабораториях станций переливани крови.

Методы исследования:

  • непрямой антиглобулиновый тест (гелевый тест) с панелью стандартных эритроцитов, состоящей не менее, чем из 10 видов клеток, типированных по всем клинически значимым антигенам;
  • типирование антигена(ов) эритроцитов реципиента, к которому(ым) предположительно обнаружены антитела.

Идентификация антител считается завершенной при соответствии результатов реакций с панелью эритроцитов результатам типирования антигенов. Справка о наличии антител с указанием их специфичности и рекомендаций по выбору гемокомпонентов для переливания выдается на руки реципиенту для предъявления при последующих госпитализациях. В дальнейшем этому реципиенту для переливания выбирают эритроцитсодержащие гемокомпоненты с отсутствием антигена, к которому выявлены антитела, даже если антитела повторно не выявляются.

2. ДОНОРЫ

2.1. Всем донорам крови или ее компонентов, должны быть выполнены необходимые иммуногематологические исследования. При проведении этих исследований все доноры рассматриваются как доноры гемокомпонентов. При внесении данных о групповой и резус-принадлежности в документ донора он рассматривается как реципиент гемокомпонентов (см. п.1.)

2.2. Группа крови по системе АВО первично определяется до донации простой реакцией (стандартными изогемагглютинирующими сыворотками или моноклональными антителами). Результат записывается в карте донора с обязательным указанием серий используемых реагентов и даты определения.

2.3. Вместе с направлением в подтверждающую лабораторию для выполнения иммуногематологических исследований передается промаркированный образец крови донора, заготовленный из вены в количестве не менее 5мл в чистую сухую пробирку или в пробирку с любым консервантом (стабилизатором). Срок хранения крови до исследования не должен превышать 48 часов при температуре +4°С.

2.4. В подтверждающей лаборатории врач, прошедший специальную подготовку по иммуногематологии выполняет определение группы крови (АВО) перекрестным методом и резус (D,С, Е)-принадлежности переданного образца крови больного, а также типирование по антигенам систем Rh/K и исследование на наличие аллоиммунных антител. Результаты определения фиксируются в рабочем журнале и выносятся на лицевую сторону карты донора, с датой и подписью врача.

Методы исследования:

Определение группы крови по системе АВО перекрестным методом.

  • простая реакция с моноклональными антителами (изогемагглютинирующими сыворотками)
  • перекрестный метод -с моноклональными антителами (изогемагглютинирующими сыворотками) и стандартными эритроцитами А1, В, 0;
  • гелевый тест.

Наличие слабой агглютинации при выявлении антигена А и/или экстрагглютинина анти-А1 требует дополнительной верификации подгруппы антигена А (А2) с реагентами анти-А1 и анти-Н.

Определение резус-принадлежности (антиген D, C, E) эритроцитов.

  • реакция прямой агглютинации с моноклональными антителами анти-D, анти-С, анти-Е;
  • реакция с универсальным реагентом антирезус (D);
  • реакция конглютинации с 10% раствором желатина;
  • непрямой антиглобулиновый тест;
  • гелевый тест.

Определение слабых вариантов антигена D (Du) является обязательным.

При наличии слабых вариантов антигена D (Du), резус-принадлежность донора считается положительной. Резус-принадлежность донора считается отрицательной только при отсутствии антигенов D, C, E.

Определение К-принадлежности эритроцитов

Эритроциты К-положительных доноров не выдаются для переливания К-отрицательным реципиентам. Рекомендуется криоконсервирование К-положительных эритроцитов для подбора и выдачи К-положительным реципиентам.

Типирование антигенов с и е

Типирование антигенов эритроцитов систем Rh/K,производится троекратно различными сериями типирующих реагентов. При совпадении результатов Rh/K-фенотип считается установленным и при последующих кроводачах не определяется. Применение гелевой технологии позволяет производить типирование двукратно. Также осуществляется типирование антигенов эритроцитов других систем.

Скрининг антиэритроцитарных аллоантител

Является обязательным для всех доноров гемокомпонентов, вне зависимости от групповой и резус-принадлежности крови. Выполняется при каждой донации.

Методы исследования:

  • непрямой антиглобулиновый тест (гелевый тест) с панелью стандартных эритроцитов, состоящей не менее, чем из 3-х видов клеток, типированных по всем клинически значимым антигенам.

Обнаружение антиэритроцитарных аллоантител в образце донорской крови является основанием не допускать к переливанию плазму и ее компоненты, заготовленные от донора. Допускается донорство эритроцитов. Плазма доноров с аллоантителами может быть использована для изготовления препаратов и иммуногематологических диагностикумов.

Идентификация антиэритроцитарных аллоантител

Методы исследования:

  • непрямой антиглобулиновый тест (гелевый тест) с панелью стандартных эритроцитов, состоящей не менее, чем из 10 видов клеток, типированных по всем клинически значимым антигенам.
  • типирование антигена(ов) эритроцитов реципиента, к которому(ым) предположительно обнаружены антитела.

Идентификация антител считается завершенной при соответствии результатов реакций с панелью эритроцитов результатам типирования антигенов.

3. БЕРЕМЕННЫЕ ЖЕНЩИНЫ

Все беременные женщины должны проходить плановые иммуногематологические исследования (см. схему) для возможной профилактики резус-сенсибилизации и выявления причин гемолитической болезни плода и новорожденного.

3.1. Определение группы крови по системе АВО перекрестным методом

Выполняется дважды в процессе беременности в соответствии с требованиями для иммуногематологического исследования крови пациентов (см. п.1.)

Наличие слабой агглютинации при выявлении антигена А и/или экстрагглютинина анти-А1 требует дополнительной верификации подгруппы антигена А (А2) с реагентами анти-А1 и анти-Н.

3.2. Определение резус-принадлежности (антиген D)

Выявление слабых вариантов антигена D (Du) является обязательным.

При обнаружении слабых вариантов антигена D (Du), резус-принадлежность беременных женщин считается отрицательной, но иммуноглобулин анти-резус не назначается. В таких случаях целесообразно выполнить полное типирование эритроцитов по основным антигенам систем Rh/K для точных рекомендаций по выбору гемокомпонентов для возможных трансфузий.

3.3. Скрининг антиэритроцитарных аллоантител в непрямом антиглобулиновом тесте и солевой реакции с эритроцитами биологического отца ребенка или панелью стандартных эритроцитов, состоящей не менее, чем из 3-х видов клеток, типированных по всем клинически значимым антигенам.

Скрининг антител производится вне зависимости от резус-принадлежности беременной женщины. Обнаружение антиэритроцитарных аллоантител является показанием к определению их титра и назначению повторных исследований в течение беременности для определения динамики титров антител.

При несовместимости крови беременной женщины и биологического отца ребенка по антигенам системы АВО, необходимо проведение скрининга и определения титров иммунных антител системы АВО в динамике.

3.4. Идентификация антиэритроцитарных аллоантител с эритроцитами биологического отца ребенка и(или) панелью стандартных эритроцитов, состоящей не менее, чем из 10 видов клеток, типированных по всем клинически значимым антигенам. Типирование антигена(ов) эритроцитов реципиента, к которому(ым) предположительно обнаружены антитела.

Идентификация антител считается завершенной при соответствии результатов реакций с панелью эритроцитов результатам типирования антигенов. В дальнейшем женщине для переливания выбирают эритроцитсодержащие гемокомпоненты с отсутствием антигена, к которому выявлены антитела, даже если антитела повторно не выявляются. Наличие антиэритроцитарных аллоантител является прогностическим признаком возможного иммуногематологического конфликта матери и плода, чреватого развитием гемолитической болезни плода и новорожденного. В этом случае в индивидуальном подборе по антигенам эритроцитов нуждается как сама беременная женщина, так и плод (новорожденный) при выполнении заменных переливаний.

4. НОВОРОЖДЕННЫЕ

4.1. Определение группы крови по системе АВО перекрестным методом (см. п.1.)

В норме антитела системы АВО у новорожденных могут отсутствовать. В этих случаях заключение о групповой принадлежности делают по антигенам эритроцитов.

Верификация подгруппы антигена А у детей до 18 месяцев не производится.

4.2. Определение резус-принадлежности (антиген D)

При обнаружении слабых вариантов антигена D (Du), резус-принадлежность новорожденного считается отрицательной. В таких случаях целесообразно выполнить полное типирование эритроцитов по основным антигенам систем Rh/K для точных рекомендаций по выбору гемокомпонентов для возможных трансфузий.

4.3. Определение антител, фиксированных на эритроцитах (прямая реакция Кумбса)

Выполняется новорожденным при подозрении на гемолитическую болезнь (ГБН). Положительный результат прямой реакции Кумбса подтверждает диагноз ГБН, отрицательный же ее не исключает.

4.4. Скрининг антиэритроцитарных аллоантител в непрямом антиглобулиновом тесте и солевой реакции с панелью стандартных эритроцитов, состоящей не менее, чем из 3-х видов клеток, типированных по всем клинически значимым антигенам.

Скрининг антител производится для установления причин ГБН и точных рекомендаций по выбору гемокомпонентов для возможных трансфузий. Обнаружение антиэритроцитарных аллоантител является показанием к определению их титра и специфичности (идентификации). Одновременно необходимо определять антитела в сыворотке крови матери.

4.5. Идентификация антиэритроцитарных аллоантител с панелью стандартных эритроцитов, состоящей не менее, чем из 10 видов клеток, типированных по всем клинически значимым антигенам. Типирование антигена(ов) эритроцитов реципиента, к которому(ым) предположительно обнаружены антитела.

Идентификация антител считается завершенной при соответствии результатов реакций с панелью эритроцитов результатам типирования антигенов. В дальнейшем ребенку для переливания выбирают эритроцитсодержащие гемокомпоненты с отсутствием антигена, к которому выявлены антитела, даже если антитела повторно не выявляются. В этом случае новорожденный нуждается в индивидуальном подборе по сыворотке матери и собственной сыворотке при выполнении заменных переливаний.

5. ИНДИВИДУАЛЬНЫЙ ПОДБОР ГЕМОКОМПОНЕНТОВ ДЛЯ ТРАНСФУЗИЙ

5.1. Индивидуальный подбор может быть рекомендован всем реципиентам гемокомпонентов.

Обязательно его выполнение при каждой плановой трансфузии эритроцитсодержащих гемокомпонентов для:

  • реципиентов с отягощенным акушерским и трансфузионным анамнезом;
  • реципиентов с положительным результатом скрининга антител;
  • сенсибилизированных реципиентов (по данным анамнеза), независимо от выявления антител в настоящий момент;
  • новорожденных;
  • пациентов педиатрических стационаров;
  • беременных женщин, рожениц, родильниц;
  • пациентов при неэффективности трансфузий эритроцитсодержащих гемокомпонентов;
  • пациентов гематологических и онкологических стационаров;
  • пациентов гемодиализа;
  • реципиентов органов и тканей.

5.2. Для выполнения индивидуального подбора в специализированную лабораторию ОПК или СПК передается промаркированный образец крови больного, заготовленный из вены в количестве не менее 5мл в чистую сухую пробирку или в пробирку с любым консервантом (стабилизатором). Срок хранения крови до исследования не должен превышать 48 часов при температуре +4°С. В направлении указывается: ФИО больного, возраст, отделение, N палаты, N истории болезни, группа крови (АВО), резус-принадлежность (фенотип). Обязательно наличие заполненного требования на эритроцитсодержащий гемокомпонент. У новорожденных индивидуальный подбор осуществляется дополнительно по сыворотке крови матери, поэтому образец крови матери и новорожденного должны быть доставлены в лабораторию одновременно.

5.3. Для выполнения индивидуального подбора в специализированной лаборатории ОПК или СПК отбираются промаркированные образцы крови доноров, заготовленные из вены или же выделенные из контейнеров с гемокомпонентами в количестве не менее 1мл.

Индивидуальный подбор осуществляется из совместимых с реципиентом по группе крови, резус-принадлежности (фенотипу) образцов крови доноров.

5.4. При выполнении индивидуального подбора в специализированной лаборатории проводят в полученных образцах крови доноров и реципиента:

  • повторное определение группы (АВО) и резус-принадлежности;
  • пробу на совместимость сыворотки (плазмы) крови реципиента и эритроцитов каждого образца крови доноров гемокомпонентов в холодовой (солевой) среде для выявления несовместимости, вызванной полными антителами (IgM);
  • пробу на совместимость сыворотки (плазмы) крови реципиента и эритроцитов каждого образца крови доноров гемокомпонентов в непрямом антиглобулиновом тесте для выявления несовместимости, вызванной неполными антителами (IgG);

5.5. Результаты исследований фиксируются в журнале индивидуального подбора крови и выдаются на бланке индивидуального подбора с обязательным указанием ФИО, группы крови, резус-принадлежности (фенотипа) реципиента и идентификационных номеров, ФИО, групп крови, резус-принадлежности (фенотипов) всех подобранных образцов крови доноров гемокомпонентов с обязательным указанием методов индивидуального подбора, даты и подписи врача, осуществлявшего исследование.

5.6. Для трансфузий отбираются только гемокомпоненты доноров, совместимых по антигенам эритроцитов во всех этапах индивидуального подбора. Несовместимость на любом этапе индивидуального подбора является противопоказанием к трансфузии гемокомпонента от данного донора.

5.7. Бланк индивидуального подбора выдается в ЛПУ вместе с гемокомпонентом и вклеивается в историю болезни реципиента при осуществлении трансфузии данного гемокомпонента.

5.8. Перед трансфузией гемокомпонентов по индивидуальному подбору врач, осуществляющий трансфузию, обязательно определяет групповую принадлежность крови доноров и реципиента. Убедившись в том, что они совпадают с данными истории болезни и бланка индивидуального подбора врач проводит биологическую пробу на совместимость и осуществляет трансфузию гемокомпонентов.

При обнаружении расхождений на любом этапе иммуногематологических исследований, они должны быть разрешены до трансфузий гемокомпонентов реципиенту.

ГРУППЫ КРОВИ

Группы крови — нормальные иммуногенетические признаки крови, позволяющие объединять людей в определенные группы по сходству антигенов их крови. Последние получили название групповых антигенов (см.), или изоантигенов. Принадлежность человека к той или иной Группе крови является его индивидуальной биол, особенностью, к-рая начинает формироваться уже в раннем периоде эмбрионального развития и не меняется в течение всей последующей жизни. Некоторые групповые антигены (изоантигены) находятся не только в форменных элементах и плазме крови, но и в других клетках и тканях, а также в секретах: слюне, амниотической жидкости, жел.-киш. соке и др. Внутривидовая изоантигенная дифференцировка присуща не только Людям, но и животным, у которых найдены свои особые Группы крови.

Знания о Группах крови лежат в основе учения о переливании крови (см.), широко применяются в клинической практике и судебной медицине. Генетика человека и антропология не могут обойтись без использования групповых антигенов как генетических маркеров.

Имеется большая литература о связи Групп крови с различными инфекционными и неинфекционными болезнями человека. Однако этот вопрос находится еще в стадии изучения и накопления фактов.

Наука о Г. к. возникла в конце 19 в. как один из разделов общей иммунологии (см.). Поэтому естественно, что такие категории иммунитета, как понятия об антигенах (см.) и антителах (см.), их специфичности, полностью сохраняют свое значение и при изучении изоантигенной дифференцировки организма человека.

В эритроцитах, лейкоцитах, тромбоцитах, а также в плазме крови людей открыто много десятков изо-антигенов. В табл. 1 представлены наиболее изученные изоантигены эритроцитов человека (об изоантигенах лейкоцитов, тромбоцитов, а также изоантигенах сывороточных белков — см. ниже).

Строма каждого эритроцита вмещает в себе большое число изоантигенов, характеризующих внутривидовые группоспецифические признаки организма людей. По-видимому, истинное число антигенов на поверхности мембран эритроцитов человека значительно превышает число уже открытых изоантигенов. Наличие или отсутствие в эритроцитах того или другого антигена, а также различные сочетания их создают большое разнообразие антигенных структур, присущих людям. Если принять во внимание даже далеко не полный набор изоантигенов, открытых в форменных элементах и в белках плазмы крови, то прямой подсчет укажет на существование многих тысяч иммунологически различимых комбинаций.

Изоантигены, находящиеся в генетической связи, объединены в группы, получившие название систем AB0, резус и др.

Содержание

  • 1 Группы крови системы AB0
  • 2 Группа крови системы Rh
  • 3 Группа крови системы MNSs
  • 4 Группы крови системы P
  • 5 Группы крови системы Kell
  • 6 Группы крови системы Duffy
  • 7 Группы крови системы Kidd
    • 7.1 Группы крови системы Lewis
  • 8 Группы крови системы Lutheran
  • 9 Группы крови системы Diego
  • 10 Группы крови системы Auberger
  • 11 Группы крови системы Dombrock
  • 12 Группы крови системы Ii
  • 13 Группы крови системы Yt
  • 14 Группы крови системы Xg
  • 15 Редко встречающиеся группы крови
  • 16 Методика определения групп крови
  • 17 Определение групп крови системы AB0
  • 18 Определение групп крови системы MNSs
  • 19 Определение групп крови систем Kell, Duffy, Kidd, Lutheran
  • 20 Определение групп крови систем P и Lewis
  • 21 Определение резус-фактора
  • 22 Лейкоцитарные группы
  • 23 Группы сывороточных белков
  • 24 Группы крови в судебно-медицинском отношении

Группы крови системы AB0

Группы крови системы AB0 открыты в 1900 г. К. Ландштейнером. Смешивая эритроциты одних лиц с нормальными сыворотками крови других, он обнаружил, что при одних сочетаниях сывороток и эритроцитов наблюдается гемагглютинация (см.), при других — ее нет. На основании этих факторов К. Ландштейнер пришел к заключению, что кровь различных людей неоднородна и может быть условно разделена на три группы, которые он обозначил буквами А, В и С. Вскоре после этого Декастелло и Штурли (A. Decastello, A. Sturli, 1902) нашли людей, эритроциты и сыворотки которых отличались от эритроцитов и сывороток упомянутых трех групп. Эту группу они рассматривали как отклонение от схемы Ландштейнера. Однако Я. Янский в 1907 г. установил, что эта Г. к. не исключение из схемы Ландштейнера, а самостоятельная группа, и, следовательно, все люди по иммунол, свойствам крови делятся на четыре группы.

Различия агглютинабельных свойств эритроцитов зависят от имеющихся в них определенных специфических для каждой группы веществ — агглютиногенов (см. Агглютинация), которые по предложению Дунгерна (E. Dungern) и Л. Гиршфельда (1910) обозначают буквами А и В. В соответствии с этим обозначением эритроциты одних лиц не содержат агглютиногенов А и В (I группа по Янскому, или 0 группа), эритроциты других содержат агглютиноген А (II группа крови), эритроциты третьих лиц содержат агглютиноген В (III группа крови), эритроциты четвертых содержат агглютиноген А и В (IV группа крови).

В зависимости от наличия или отсутствия в эритроцитах групповых антигенов А и В в плазме находятся нормальные (естественные) изоантитела (Гемагглютинины) по отношению к этим антигенам. У лиц группы 0 содержатся два типа групповых антител: анти-А и анти-В (альфа и бета). У лиц группы А содержится изоантитело р (анти-В), у лиц группы В — изоантитело а (анти-А) и у лиц группы АВ оба гемагглютинина отсутствуют. Соотношения между изоантигенами и изоантителами представлены в табл. 2.

Таблица 1. НЕКОТОРЫЕ СИСТЕМЫ ИЗОАНТИГЕНОВ ЭРИТРОЦИТОВ ЧЕЛОВЕКА

А1, А2, А3, А4, А5, А0, Az, B, 0, H

M, N, S, s, U, Мg, M1, М2, N2, Мc, Ма, Mv, Mk, Tm, Hu, He, Mia, Vw(Gr), Mur,

Hil, Vr, Ria, Sta, Mta, Cla, Nya, Sul, Sj, S2

D, C, c, Cw, Cx, E, e, es (VS), Ew, Du, Cu, Eu, ce, Ces (V), Ce, CE, cE, Dw, Et LW

Lea, Leb, Lec, Led

K, k, Kpa, Kpb, Jsa, Jsb

Таблица 2. ЗАВИСИМОСТЬ МЕЖДУ ИЗОАНТИГЕНАМИ СИСТЕМЫ AB0 В ЭРИТРОЦИТАХ И ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИНАМИ В СЫВОРОТКЕ

Обозначение группы крови

Изоантигены в эритроцитах

Изоантитела в плазме (сыворотке)

альфа и бета (анти-А и анти-В)

Таблица 3. РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ СИСТЕМЫ AB0 (в %) СРЕДИ ОБСЛЕДОВАННОГО НАСЕЛЕНИЯ СССР

Автор и год обследования

М. А. Умнова и др., 1964

Т. Г. Соловьева, 1964

По материалам мед. учреждений

Б. Г. Садыков и др., 1961

Принято буквенное, а не цифровое обозначение Г. к., а также полное написание формулы Г.к., учитывающее как антигены эритроцитов, так и антитела сыворотки (0αβ, Aβ, Bα, AB0). Как видно из табл. 2, группу крови характеризуют в равной мере как изоантигены, так и изоантитела. При определении Г. к. необходимо учитывать оба эти показателя, поскольку могут встречаться лица со слабовыраженными изоантигенами эритроцитов и лица, у которых изоантитела недостаточно активны или даже отсутствуют.

Дунгерн и Гиршфельд (1911) нашли, что групповой антиген А не является однородным и может быть подразделен на две подгруппы — А1 и А2 (по терминологии, предложенной К. Ландштейнером). Эритроциты подгруппы А1 хорошо агглютинируются соответствующими сыворотками, а эритроциты подгруппы А2 — слабо, и для выявления их необходимо применять высокоактивные стандартные сыворотки группы Вα й 0αβ. Эритроциты группы А1 встречаются в 88%, а группы А2 — в 12%. В дальнейшем были найдены варианты эритроцитов с еще более слабо выраженными агглютинабельными свойствами: А3, А4, А5, Az, А0 и др. С возможностью существования таких слабоагглютинирующихся вариантов эритроцитов группы А необходимо считаться в практике определения Г. к., несмотря на то, что они встречаются весьма редко. Групповой антиген

В, в отличие от антигена А, характеризуется большей однородностью. Описаны, однако, редкие варианты и этого антигена — В2, В3, Bw, Вх и др. Эритроциты, содержащие один из этих антигенов, обладали слабо выраженными агглютинабельными свойствами. Применение высокоактивных стандартных сывороток Аβ и 0αβ позволяет выявить и эти слабовыраженные агглютиногены В.

Эритроциты группы 0 характеризуются не только отсутствием в них агглютиногенов А и В, но и наличием особых специфических антигенов H и 0. Антигены H и 0 содержатся не только в эритроцитах группы 0, но и в эритроцитах подгруппы А2 и менее всего — в эритроцитах подгруппы А1 и А1В.

Если наличие антигена H в эритроцитах сомнений не вызывает, то вопрос о самостоятельности существования антигена 0 окончательно еще не решен. Согласно исследованиям Моргана и Уоткинса (W. Morgan, W. Watkins, 1948), отличительной особенностью антигена H является наличие его в биол, жидкостях секреторов групповых веществ и отсутствие — у несекреторов. Антиген 0, в отличие от антигена Н, А и В, с секретами не выделяется.

Большое значение в практике определения антигенов системы AB0, и в особенности подгрупп А1 и А2, приобрели открытые Бойдом (W. Boyd, 1947, 1949) и независимо от него Ренконеном (К. Renkonen, 1948) вещества растительного происхождения — фитогемагглютинины. Специфические в отношении групповых антигенов фитогемагглютинины называют также лектинами (см.). «Пектины чаще находят в семенах бобовых растений сем. Leguminosa. Водно-солевые экстракты из семян Dolichos biflorus и Ulex europeus могут служить идеальной комбинацией фитогемагглютининов для определения подгрупп в группах А и АВ. Лектины, полученные из семян Dolichos biflorus, реагируют с эритроцитами группы А1 и А1В и не реагируют с эритроцитами-группы А2 и А2В. Лектины, полученные из семян Ulex europeus, наоборот, реагируют с эритроцитами группы А2 и А2В. Лектины из семян Lotus tetragonolobus и Ulex europeus применяют для обнаружения антигена Н.

В семенах Sophora japonica найдены лектины (анти-В) по отношению к эритроцитам группы В.

Найдены лектины, реагирующие с антигенами других систем Г. к. Обнаружены и специфические фитопреципитины.

Своеобразный антигенно-серо л, вариант крови был обнаружен Бхенде (Y. Bhende) с соавт, в 1952 г. у жителя Бомбея, эритроциты к-рого не содержали ни одного из известных антигенов системы AB0, а в сыворотке имелись антитела анти-А, анти-В и анти-Н; этот вариант крови получил название «Bombay» (Oh). В дальнейшем вариант крови типа Bombay находили у людей и в других частях земного шара.

Антитела по отношению к групповым антигенам системы AB0 бывают нормальные, естественно возникающие в процессе формирования организма, и иммунные, проявляющиеся в результате иммунизации человека, напр. при введении иногруппной крови. Нормальные изоантитела анти-А и анти-В являются обычно иммуноглобулинами М (IgM) и более активны при пониженной (20—25 °) температуре. Иммунные групповые изоантитела чаще связаны с иммуноглобулинами G (IgG). В сыворотке могут, однако, встречаться все три класса групповых иммуноглобулинов (IgM, IgG и IgA). В молоке, слюне, мокроте часто находятся антитела секреторного типа (IgA). Ок. 90% иммуноглобулинов, обнаруживаемых в молозиве, относятся к классу IgA. Титр антител IgA в молозиве выше, чем в сыворотке. У лиц группы 0 оба типа антител (анти-A и анти-B) принадлежат обычно к одному классу иммуноглобулинов (см.). Как IgM, так и IgG групповые антитела могут обладать гемолитическими свойствами, т. е. связывать комплемент при наличии в строме эритроцитов соответствующего антигена. Напротив, антитела секреторного типа (IgA) гемолиза не вызывают, поскольку не связывают комплемент. Для агглютинации эритроцитов требуется в 50— 100 раз меньше молекул IgM антител, чем молекул IgG групповых антител.

Нормальные (естественные) групповые антитела начинают появляться у человека в первые месяцы после рождения и достигают максимального титра приблизительно к 5—10 годам. После этого титр антител держится на относительно высоком уровне в течение многих лет, а затем с возрастом происходит постепенное его снижение. Титр гемагглютининов анти-А в норме варьирует в пределах 1 : 64 — 1 : 512, а титр гемагглютининов анти-В — в пределах 1:16 — 1 : 64. В редких случаях естественные Гемагглютинины могут быть выражены слабо, что затрудняет их выявление. Такого рода случаи наблюдаются при гипогаммаглобулинемии или агаммаглобулинемии (см.). Помимо гемагглютининов, в сыворотках здоровых людей встречаются и нормальные групповые гемолизины (см. Гемолиз), но в невысоком титре. Гемолизины анти-А, как и соответственные им агглютинины, более активны, чем гемолизины анти-В.

У человека могут появляться и иммунные групповые антитела в результате парентерального поступления в организм несовместимых в групповом отношении антигенов. Такого рода процессы изоиммунизации могут иметь место при переливании как цельной несовместимой крови, так и отдельных ее ингредиентов: эритроцитов, лейкоцитов, плазмы (сыворотки). Чаще всего встречаются иммунные антитела анти-А, которые образуются у лиц группы крови 0 и В. Иммунные антитела анти-В встречаются реже. Введение в организм веществ животного происхождения, сходных с групповыми антигенами А и В человека, может также приводить к появлению групповых иммунных антител. Иммунные групповые антитела могут появляться и в результате изоиммунизации в период беременности в случае принадлежности плода к группе крови, несовместимой с группой крови матери. Иммунные гемолизины и Гемагглютинины могут возникать и в результате парентерального применения в леч.-проф, целях некоторых препаратов (сывороток, вакцин и др.), содержащих сходные с групповыми антигенами вещества.

Сходные с групповыми антигенами человека вещества широко распространены в природе и могут быть причиной иммунизации. Эти вещества обнаружены и у некоторых бактерий. Отсюда следует, что некоторые инфекции также могут стимулировать образование иммунных антител по отношению к эритроцитам группы А и В. Образование иммунных антител по отношению к групповым антигенам представляет не только теоретический интерес, но имеет и большое практическое значение. Лица с группой крови 0αβ считаются обычно универсальными донорами, т. е. их кровь может быть перелита лицам всех групп без исключения. Однако положение об универсальном доноре не является абсолютным, поскольку могут встречаться лица группы 0, переливание крови которых вследствие наличия в ней иммунных гемолизинов и гемагглютининов с высоким титром (1 : 200 и более) может привести к летальным исходам. Среди универсальных доноров, т. о., могут быть и «опасные» доноры, и поэтому кровь этих лиц может быть перелита только пациентам с одноименной (0) группой крови (см. Переливание крови).

Групповые антигены системы AB0, помимо эритроцитов, были найдены также в лейкоцитах и тромбоцитах. И. Л. Кричевский и Л. А. Шварцман (1927) впервые обнаружили групповые антигены А и В в фиксированных клетках различных органов <мозга, селезенки, печени, почки). Они показали, что органы людей группы крови А, как и их эритроциты, содержат антиген А, а органы людей группы крови В соответственно эритроцитам обладают антигеном

В. В дальнейшем групповые антигены были найдены почти во всех тканях человека (мышцах, коже, щитовидной железе), а также в клетках доброкачественных и злокачественных опухолей человека. Исключение составил хрусталик глаза, в к-ром групповые антигены не найдены. Антигены А и В обнаружены в сперматозоидах, жидкости спермы. Особенно богаты групповыми антигенами амниотическая жидкость, слюна, желудочный сок. Мало групповых антигенов в сыворотке крови и в моче, а в цереброспинальной жидкости они практически отсутствуют.

Секреторы и несекреторы групповых веществ. По способности выделять групповые вещества с секретами всех людей делят на две группы: секреторов (Se) и несекреторов (se). По материалам Р. М. Уринсон (1952), 76% людей являются секреторами и 24% — несекреторами групповых антигенов. Доказано существование промежуточных групп между сильными и слабыми секреторами групповых веществ. Содержание групповых антигенов в эритроцитах секреторов и несекреторов одинаково. Однако в сыворотке и в тканях органов несекреторов групповые антигены обнаруживаются в более слабой степени, чем в тканях секреторов. Способность организма выделять групповые антигены с секретами передается по наследству по доминантному типу. Дети, родители которых относятся к несекреторам групповых антигенов, также являются несекреторами. Лица, обладающие доминантным геном секреции, способны выделять с секретами групповые вещества, лица же, имеющие рецессивный ген несекреции, этой способностью не обладают.

Биохимическая природа и свойства групповых антигенов. Групповые антигены А и В крови и органов устойчивы к действию этилового спирта, эфира, хлороформа, ацетона и формалина, высокой и низкой температуры. Групповые антигены А и В в эритроцитах и в секретах связаны с различными молекулярными структурами. Групповые антигены А и В эритроцитов — это гликолипиды (см.), а групповые антигены секретов — гликопротеиды (см.). Групповые гликолипиды А и В, выделенные из эритроцитов, содержат жирные к-ты, сфингозин и углеводы (глюкозу, галактозу, глюкозамин, галактозамин, фукозу и сиаловую к-ту). Углеводная часть молекулы связана с жирными к-тами через сфингозин. Гликолипидные препараты групповых антигенов, выделенные из эритроцитов, являются гаптенами (см.); они специфически реагируют с соответствующими антителами, но не способны вызывать продукцию антител у иммунизированных животных. Присоединение к этому гаптену белка (напр., лошадиной сыворотки) превращает групповые гликолипиды в полноценные антигены. Это дает возможность заключить, что и в нативных эритроцитах, которые являются полноценными антигенами, групповые гликолипиды связаны с белком. Очищенные групповые антигены, выделенные из кистозной жидкости яичника, содержат 85% углеводов и 15% аминокислот. Средний мол. вес этих веществ составляет 3 X X 105 — 1 х 106 дальтон. Ароматические аминокислоты присутствуют только в очень незначительных количествах; аминокислоты, содержащие серу, не обнаружены. Групповые антигены А и В эритроцитов (гликолипиды) и секретов (глико-протеины), хотя и связаны с различными молекулярными структурами, имеют идентичные антигенные детерминанты. Групповая специфичность гликопротеидов и гликолипидов определяется углеводными структурами. Небольшое число сахаров, располагающихся на концах углеводной цепи, является важной частью специфической антигенной детерминанты. Как показал хим. анализ [Уоткинс (W. Watkins), 1966], в состав антигенов А, В, Ни Lea входят одинаковые углеводные компоненты: альфа-гексоза, D-галактоза, альфа-метил-пентоза, L-фукоза, два аминосахара — N-ацетил глюкозамин и N-ацетил-D-галактозамин и N-ацетилнейра-миновая к-та. Однако формирующиеся из этих углеводов структуры (антигенные детерминанты) неодинаковы, что и определяет специфику групповых антигенов. L-фукоза играет важную роль в структуре детерминанта антигена Н, N-ацетил-D-галактозамин — в структуре детерминанта антигена А, а D-галак-тоза — в структуре детерминанта группового антигена В. Пептидные компоненты в структуре детерминантов групповых антигенов участия не принимают. Они, как предполагают, способствуют лишь строго определенному расположению в пространстве и ориентации углеводных цепей, придают им определенную жесткость структуры.

Генетический контроль биосинтеза групповых антигенов. Биосинтез групповых антигенов осуществляется под контролем соответствующих генов. Определенный порядок сахаров в цепи групповых полисахаридов создается не путем матричного механизма, как для протеинов, а возникает в результате строго координированного действия специфических гликозил-трансферазных энзимов. Согласно гипотезе Уоткинса (1966), групповые антигены, структурные детерминанты которых являются углеводами, можно рассматривать как вторичные продукты генов. Первичными же продуктами генов являются протеины — гликозилтрансферазы, катализирующие перенос сахаров от гликозильного производного нуклеозиддифосфата на углеводные цепи гликопротеинапредшественника. Серол., генетические и биохим, исследования дают основание предполагать, что гены А, В и Le контролируют гликозилтрансферазные энзимы, которые катализируют присоединение соответствующих единиц сахаров к углеводным цепям преформированной гликопротеиновой молекулы. Рецессивные аллели этих локусов функционируют как неактивные гены. Хим. природа вещества-предшественника еще в должной мере не определена. Одни исследователи считают, что общим для всех групповых антигенов-предшественников является гликопротеидное вещество, идентичное по своей специфичности полисахариду пневмококка XIV типа. На основе этого вещества строятся под влиянием генов А, В, Н, Le соответствующие антигенные детерминанты. Вещество антигена H является основной структурой, к-рая входит во все групповые антигены системы AB0. Другие исследователи [Фейзи, Кабат (Т. Feizi, E. Kabat), 1971] представили доказательства, что предшественник групповых антигенов — вещество антигена I.

Изоантигены и изоантитела системы AB0 в онтогенезе. Групповые антигены системы AB0 начинают обнаруживаться в эритроцитах человека в раннем периоде его эмбрионального развития. Групповые антигены находили в эритроцитах плода на втором месяце эмбриональной жизни. Рано сформировавшись в эритроцитах плода, групповые антигены А и В достигают наибольшей активности (чувствительности к соответствующим антителам) к трем годам жизни. Агглютинабельность эритроцитов новорожденных составляет 1/5 часть агглютинабельности эритроцитов взрослых. Достигнув максимума, титр агглютиногенов эритроцитов в течение нескольких десятков лет держится на постоянном уровне, а затем наблюдается постепенное его снижение. Присущая каждому человеку специфичность индивидуальной групповой дифференцировки сохраняется в течение всей его жизни вне зависимости от перенесенных инфекционных и неинфекционных заболеваний, а также от воздействий на организм различных физ.-хим. факторов. В течение всей индивидуальной жизни человека происходят лишь количественные изменения в титре его групповых гемагглютиногенов А и В, но не качественные. Помимо возрастных изменений, о которых говорилось выше, рядом исследователей было отмечено снижение агглютинабельности эритроцитов группы А у больных лейкозом. Предполагают, что у этих лиц имело место изменение процесса синтеза предшественников антигенов А и В.

Наследование групповых антигенов. Вскоре после открытия у людей Г. к. было отмечено, что групповые антигенно-серол. свойства крови детей находятся в строго определенной зависимости от групповой принадлежности крови их родителей. Дунгерн (E. Dungern) и Л. Гиршфельд в результате обследования семей пришли к заключению, что групповые признаки крови передаются по наследству посредством двух независимых друг от друга генов, которые они обозначили, как и соответствующие им антигены, буквами А и В. Бернштейн (F. Bernstein, 1924), основываясь на законах наследования Г. Менделя, подверг математическому анализу факты наследования групповых признаков и пришел к заключению о существовании третьего генетического признака, определяющего группу 0. Этот ген, в отличие от доминантных генов А и В, является рецессивным. Согласно теории Фурухаты (Т. Furuhata, 1927), по наследству передаются гены, определяющие развитие не только антигенов А, В и 0(H), но и гемагглютининов аир. Агглютиногены и агглютинины наследуются в коррелятивной связи в виде следующих трех генетических признаков: 0αβр, Аβ и Вα. Сами антигены А и В не являются генами, но развиваются под специфическим влиянием генов. Группа крови, как и любой наследственный признак, развивается под специфическим влиянием двух генов, из которых один происходит от матери, а другой — от отца. Если оба гена идентичны, то оплодотворенная яйцеклетка, а следовательно, и развившийся из нее организм будут гомозиготными; если гены, определяющие один и тот же признак, неодинаковы, то организм будет обладать гетерозиготными свойствами.

В соответствии с этим генетическая формула Г. к. не всегда совпадает с фенотипической. Напр., фенотипу 0 соответствует генотип 00, фенотипу А — генотип АА и АО, фенотипу В — генотип В В и ВО, фенотипу АВ — генотип АВ.

Антигены системы AB0 неодинаково часто встречаются среди различных народов. Частота, с к-рой Г. к. встречаются среди населения некоторых городов СССР, представлена на табл. 3.

Г. к. системы AB0 имеют первостепенное значение в практике переливания крови, а также при подборе совместимых пар доноров и реципиентов при пересадке органов тканей (см. Трансплантация). О биол. значении изоантигенов и изоантител известно мало. Предполагают, что нормальные изоантигены и изоантитела системы AB0 играют роль в поддержании постоянства внутренней среды организма (см.). Имеются гипотезы о защитной функции антигенов системы AB0 пищеварительного тракта, семенной и околоплодной жидкости.

Группа крови системы Rh

Группы крови системы Rh (Rhesus) занимают второе место по значению для мед. практики. Эта система получила название от обезьян rhesus, эритроциты которых были применены К. Ландштейнером и А. Винером (1940) для иммунизации кроликов и морских свинок, от которых были получены специфические сыворотки. С помощью этих сывороток в эритроцитах человека обнаружили антиген Rh (см. Резус-фактор). Наибольший прогресс в изучении этой системы был достигнут благодаря получению изоиммунных сывороток от многорожавших женщин. Эта одна из самых сложных систем изоантигенной дифференцировки организма человека включает в себя более двадцати изоантигенов. Помимо пяти основных антигенов R h (D, С, с, E, e), в эту систему входят также их многочисленные варианты. Одни из них характеризуются пониженной агглютинабельностью, т. е. отличаются от основных антигенов R h в количественном отношении, другие варианты имеют качественные антигенные особенности.

С изучением антигенов системы Rh в значительной мере связаны успехи общей иммунологии: открытие блокирующих и неполных антител, разработка новых методов исследования (реакция Кумбса, реакция гемагглютинации в коллоидных средах, применение энзимов в иммунол, реакциях и т.д.). Успехи в диагностике и профилактике гемолитической болезни новорожденных (см.) также достигнуты гл. обр. при изучении этой системы.

Группа крови системы MNSs

Казалось, что система групповых антигенов М и N, открытая К. Ландштейнером и Ф. Левином в 1927 г., достаточно хорошо изучена и состоит из двух основных антигенов — М и N (такое название антигенам дано условно). Дальнейшие исследования, однако, показали, что эта система не менее сложна, чем система Rh, и включает ок. 30 антигенов (табл. 1). Антигены М и N были открыты при помощи сывороток, полученных от кроликов, иммунизированных эритроцитами человека. У людей антитела анти-М и в особенности анти-N встречаются редко. На многие тысячи переливаний несовместимой в отношении этих антигенов крови были отмечены лишь единичные случаи образования изо-антител анти-М или анти-N. На основании этого групповую принадлежность донора и реципиента по системе MN в практике переливания крови обычно не учитывают. Антигены М и N могут находиться в эритроцитах вместе (MN) или каждый в отдельности (М и N). Согласно данным А. И Розановой (1947), к-рая обследовала в Москве 10 000 чел., лица группы крови М встречаются в 36%, группы N — в 16%, а группы MN — в 48% случаев. По хим. природе антигены М и N являются гликопротеидами. В структуру антигенных детерминант этих антигенов входит нейраминовая к-та. Отщепление ее от антигенов путем обработки последних нейраминидазой вирусов или бактерий приводит к инактивации антигенов М и N.

Формирование антигенов М и N происходит в раннем периоде эмбриогенеза, антигены обнаруживаются в эритроцитах эмбрионов 7—8-недельного возраста. Начиная же с 3-го мес. антигены М и N в эритроцитах эмбрионов хорошо выражены и не отличаются от антигенов эритроцитов взрослых. Антигены М и N передаются по наследству. Один признак (М или N) ребенок получает от матери, другой — от отца. Установлено, что у детей могут быть только лишь те антигены, которые имеются у родителей. При отсутствии того или другого признака у родителей дети также не могут их иметь. На основании этого система MN имеет значение в суд.-мед. практике при решении вопросов спорного отцовства, материнства и подмены детей.

В 1947 г. при помощи сыворотки, полученной от многорожавшей женщины, Уолш и Монтгомери (R. Walsh, С. Montgomery) открыли антиген S, связанный с системой MN. Несколько позднее был обнаружен в эритроцитах человека и антиген s.

Антигены S и s контролируются аллельными генами (см. Аллели). У 1% людей антигены S и s могут отсутствовать. Г. к. этих лиц обозначают символом Su. Помимо антигенов MNSs, в эритроцитах некоторых лиц находят комплексный антиген U, состоящий из компонентов антигенов S и s. Встречаются и другие многообразные варианты антигенов системы MNSs. Одни из них характеризуются пониженной агглютинабельностью, другие — имеют качественные антигенные различия. В эритроцитах людей обнаружены были также антигены (Ни, Не и др.), генетически связанные с системой MNSs.

Группы крови системы P

Одновременно с антигенами М и N К. Ландштейнер и Ф. Левин (1927) открыли в эритроцитах человека антиген Р. В зависимости от наличия или отсутствия этого антигена все люди были разделены на две группы — Р+ и P—. Долгое время считали, что система P ограничивается существованием только этих двух вариантов эритроцитов, однако дальнейшие исследования показали, что и эта система более сложна. Оказалось, что эритроциты большинства Р-отрицательных субъектов содержат антиген, кодируемый другим аллеломорфным геном этой системы. Этот антиген был назван Р2, в отличие от антигена P1, который ранее обозначали как Р+. Существуют лица, у которых оба антигена (Р1 и Р2) отсутствуют. Эритроциты этих лиц обозначают буквой р. Позднее был открыт антиген Рк и доказана генетическая связь как этого антигена, так и антигена Tja с системой Р. Считают [Сангер (R. Sanger), 1955], что антиген Tja — это комплекс антигенов Р1 и Р2. Лица группы Р1 встречаются в 79 % , группы Р2 — в 21% случаев. Лица группы Рк и р встречаются очень редко. Сыворотки для обнаружения антигенов P получают как от людей (изоантитела), так и от животных (гетероантитела). Как изо-, так и гетероантитела анти-Р относятся к категории полных антител холодового типа, поскольку вызываемая ими реакция агглютинации происходит лучше всего при t° 4—16°. Описаны антитела анти-Р, активные и при температуре тела человека. Изоантигены и изоантитела системы P имеют определенное клин, значение. Отмечены случаи ранних и поздних выкидышей, причиной которых были изоантитела анти-Р. Описано несколько случаев посттрансфузионных осложнений, связанных с несовместимостью крови донора и реципиента по системе антигенов Р.

Большой интерес представляет установленная связь между системой P и холодовой пароксизмальной гемоглобинурией Доната—Ландштейнера (см. Иммуногематология). Причины возникновения аутоантител по отношению к собственным антигенам Р1 и Р2 эритроцитов остаются пока неизвестными.

Группы крови системы Kell

Антиген Kell (Келл) был открыт Кумбсом, Мурантом, Рейсом (R. Coombs, A. Mourant, R. Race, 1946) в эритроцитах ребенка, страдающего гемолитической болезнью. Название антигену дано по фамилии семьи, у членов к-рой впервые были найдены антиген Kell (К) и антитела К. У матери были найдены антитела, реагировавшие с эритроцитами ее мужа, ребенка, и 10% образцов эритроцитов, полученных от других лиц. Этой женщине переливали кровь от ее мужа, что, по-видимому, способствовало изоиммунизации.

На основании наличия антигена К в эритроцитах или его отсутствия все люди могут быть разделены на две группы: Kell-положительных и Kell-отрицательных. Через три года после открытия антигена К было установлено, что Kell-отрицательную группу характеризует не просто отсутствие антигена К, а наличие другого антигена — к. Аллен и Льюис (F. Allen, S. Lewis, 1957) нашли сыворотки, которые позволили открыть в эритроцитах людей антигены Кра и Крв, относящиеся к системе Kell. Строуп, Мак-Илрой (М. Stroup, М. Macllroy) и сотр. (1965) показали, что антигены группы Sutter (Jsa и Jsb) также генетически связаны с этой системой. Т. о., система Kell, как известно, включает три: пары антигенов: К, к; Кра; КрD; Jsa и JsB, биосинтез которых кодируется тремя парами аллельных генов К, k; Kpb, Крв; Jsa и Jsb. Антигены системы Kell передаются по наследству по общим генетическим законам. Формирование антигенов системы Kell относится к раннему периоду эмбриогенеза. В эритроцитах новорожденных эти антигены достаточно хорошо выражены. Антигены Кик обладают сравнительно высокой иммуногенной активностью. Антитела к этим антигенам могут возникать как в процессе беременности (при отсутствии того или другого антигена у матери и наличии их у плода), так и в результате повторных переливаний крови, несовместимой в отношении антигенов Kell. Описаны многие случаи гемотрансфузионных осложнений и гемолитической болезни новорожденных, причиной которых была изоиммунизация антигеном К. Антиген К, по данным Т. М. Пискуновой (1970), к-рая обследовала 1258 жителей Москвы, был у 8,03% и отсутствовал (группа kk) у 91,97% обследованных.

Группы крови системы Duffy

Катбуш, Моллисон и Паркин (М. Cutbush, P. Mollison, D. Parkin, 1950) нашли у больного гемофилией антитела, которые реагировали с неизвестным антигеном. Последний был: назван ими антигеном Duffy (Даффи), по фамилии больного, или сокращенно Fya. Вскоре после этого был обнаружен в эритроцитах и второй антиген этой системы — Fyb. Антитела по отношению к этим антигенам получают или от больных, к-рым были сделаны многократные переливания крови, или от женщин, новорожденные дети которых страдали гемолитической болезнью. Встречаются полные и чаще неполные антитела и поэтому для их обнаружения необходимо применять реакцию Кумбса (см. Кумбса реакция) или ставить реакцию агглютинации в коллоидной среде. Г. к. Fy (a+b—) встречается в 17,2%, группа Fy (а—b+) — в 34,3% и группа Fy (a+b+)— в 48,5%. Антигены Fya и Fyb передаются по наследству как доминантные признаки. Формирование антигенов Fy происходит в раннем периоде эмбриогенеза. Антиген Fya может повлечь тяжелые пост-трансфузионные осложнения при переливании крови, если не учитывать несовместимость к этому антигену. Антиген Fyb, в отличие от антигена Fya, является менее изоантигенным. Антитела по отношению к нему встречаются реже. Антиген Fya представляет большой интерес для антропологов, поскольку у одних народов он встречается сравнительно часто, а у других отсутствует.

Группы крови системы Kidd

Антитела к антигенам системы Kidd (Кидд) открыли в 1951 г. Аллен, Даймонд и Недзеля (F. Allen, L. Diamond, В. Niedziela) у женщины по фамилии Kidd, новорожденный ребенок к-рой страдал гемолитической болезнью. Соответствующий антиген в эритроцитах был обозначен буквами Jka. Вскоре после этого был найден второй антиген этой системы — Jkb. Антигены Jka и Jkb являются продуктом функции аллельных генов. Антигены Jka и Jkb передаются по наследству по общим законам генетики. Установлено, что у детей не может быть антигенов, которые отсутствуют у их родителей. Антигены Jka и Jkb встречаются у населения приблизительно одинаково часто — в 25%, у 50% людей в эритроцитах находятся оба антигена. Антигены и антитела системы Kidd имеют определенное практическое значение. Они могут быть причиной гемолитической болезни новорожденных и посттрансфузионных осложнений при многократном переливании несовместимой по антигенам этой системы крови.

Группы крови системы Lewis

Первый антиген системы Lewis (Льюис) был открыт Мурантом (A. Mourant) в 1946 г. в эритроцитах человека при помощи сыворотки, полученной от женщины по фамилии Lewis. Этот антиген был обозначен буквами Lea. Через два года Андресен (P. Andresen, 1948) сообщил об открытии второго антигена этой системы — Leb. М. И. Потапов (1970) нашел на поверхности эритроцитов человека новый антиген системы Lewis — Led, что расширило наши представления о системе изоантигенов Lewis и дало основание предположить о существовании аллеля этого признака — Lec. Т. о., возможно существование следующих Г. к. системы Lewis: Lea, Leb, Lec, Led. Антитела анти-Le гл. обр. естественного происхождения. Однако встречаются антитела, возникшие и в результате иммунизации, напр, в процессе беременности, но это наблюдается редко. Агглютинины анти-Le относятся к антителам холодового типа, т. е. они более активны при низкой (16°) температуре. Помимо сывороток человеческого происхождения, были получены и иммунные сыворотки от кроликов, коз, кур. Грубб (R. Grubb, 1948) установил зависимость между антигенами Le и способностью организма выделять групповые вещества АВН с секретами. Антигены Leb и Led встречаются у секреторов групповых веществ АВН, а антигены Lea и Lec — у несекреторов. Помимо эритроцитов, антигены системы Lewis найдены в слюне и в сыворотке крови. Рейс и другие исследователи считают, что антигены системы Lewis являются первичными антигенами слюны и сыворотки и только вторично они проявляют себя как антигены на поверхности стромы эритроцитов. Антигены Le передаются по наследству. Формирование антигенов Le определяется не только генами Le, но и находится под непосредственным влиянием генов секреции (Se) и несекреции (se). Антигены системы Lewis неодинаково часто встречаются у разных народов и как генетические маркеры представляют несомненный интерес для антропологов. Описаны редкие случаи посттрансфузионных реакций, вызванных антителами анти-Lea и еще реже — антителами анти-Leb.

Группы крови системы Lutheran

Первый антиген этой системы открыли Каллендер (S. Callender) и Рейс (R. Race) в 1946 г. при помощи антител, полученных от больного, к-рому многократно переливалась кровь. Антиген был назван по фамилии больного Lutheran (Лютеран) и обозначен буквами Lua. Через несколько лет был открыт и второй антиген этой системы — Lub. Антигены Lua и Lub могут встречаться порознь и вместе со следующей частотой: Lua — в 0,1%, Lub — в 92,4%, Lua, Lub — в 7,5%. Агглютинины анти-Lu чаще холодового типа, т. е. оптимум их реакции лежит не выше t° 16°. Очень редко антитела анти-Lub и еще реже анти-Lua могут быть причиной посттрансфузионных реакций. Имеются сообщения о значении этих антител в происхождении гемолитической болезни новорожденных. Антигены Lu определяются уже в эритроцитах пуповинной крови. Клин, значение антигенов системы Lutheran по сравнению с другими системами относительно невелико.

Группы крови системы Diego

Изоантиген Diego (Диего) открыли в 1955 г. Лейрисс, Аренде, Сиско (М. Layrisse, Т. Arends, R. Sisco) в эритроцитах человека при помощи неполных антител, обнаруженных у матери, новорожденный ребенок к-рой страдал гемолитической болезнью. На основании наличия или отсутствия антигена Diego (Dia) индейцы Венесуэлы могли быть разделены на две группы: Di (а+) и Di (а—). В 1967 г. Томпсон, Чилдере и Хетчер (Р. Thompson, D. Childers, D. Hatcher) сообщили о нахождении ими у двух мексиканских индейцев антител анти-Dih, т. е. был открыт второй антиген этой системы. Антитела анти-Di — неполной формы и поэтому для определения Г. к. Diego применяют реакцию Кумбса. Антигены Diego передаются по наследству как доминантные признаки, к моменту рождения хорошо развиты. По материалам, собранным О. Прокопом, Уленбруком (G. Uhlenbruck) в 1966, антиген Dia обнаруживали у жителей Венесуэлы (разные племена), китайцев, японцев, но он не был найден у европейцев, американцев (белых), эскимосов (Канады), австралийцев, папуасов и индонезийцев. Неодинаковая частота, с какой антиген Diego распространен среди различных народов, представляет большой интерес для антропологов. Считают, что антигены Diego присущи народам монгольской расы.

Группы крови системы Auberger

Изоантиген Au был открыт благодаря совместным усилиям франц. и англ. ученых [Сальмон, Либерж, Сангер (С. Salmon, G. Liberge, R. Sanger) и др.] в 1961 г. Название этому антигену дано по первым буквам фамилии Auberger (Оберже) — женщины, у к-рой были обнаружены антитела. Неполные антитела возникли, по-видимому, в результате многократного переливания крови. Антиген Au найден у 81,9% обследованных жителей Парижа и Лондона. Он передается по наследству. В крови новорожденных антиген Au хорошо выражен.

Группы крови системы Dombrock

Изоантиген Do открыл Свонсон (J. Swanson) с соавт, в 1965 г. при помощи неполных антител, полученных от женщины по фамилии Dombrock (Домброк), к-рая была иммунизирована в результате переливания крови. По материалам обследования 755 жителей Северной Европы (Сангер, 1970), этот антиген встречался у 66,36% — группа Do (а+) и отсутствовал у 33,64% — группа Do (а—). Антиген Doa передается по наследству как доминантный признак; в эритроцитах новорожденных этот антиген хорошо выражен.

Группы крови системы Ii

Помимо описанных выше групповых признаков крови, в эритроцитах людей были найдены также изоантигены, из которых одни весьма широко распространены, а другие, наоборот, встречаются очень редко (напр., у членов одной семьи) и приближаются к индивидуальным антигенам. Из широко распространенных антигенов наибольшее значение имеют Г. к. системы Ii. А. Винер, Унгер* Коэн, Фельдман (L. Unger, S. Cohen, J. Feldman, 1956) получили от человека, страдавшего приобретенной гемолитической анемией, антитела холодового типа, при помощи которых удалось обнаружить в эритроцитах людей антиген, обозначенный буквой «I». Из 22 000 обследованных образцов эритроцитов только 5 не содержали этого антигена или имели его в ничтожно малом количестве. Отсутствие этого антигена обозначали буквой «i». Дальнейшие исследования, однако, показали, что антиген i реально существует. У лиц группы i находятся антитела анти-I, что свидетельствует о качественном различии между антигенами I и i. Антигены системы Ii передаются по наследству. Антитела анти-I определяются в солевой среде как агглютинины холодового типа. У лиц, страдающих приобретенной гемолитической анемией холодового типа, находят обычно аутоантитела анти-I и анти-i. Причины возникновения этих аутоантител остаются еще неизвестными. Аутоантитела анти-i чаще встречаются у больных нек-рыми формами ретикулеза, миелоидной лейкемии, инфекционного мононуклеоза. Антитела анти-I холодового типа агглютинации эритроцитов при t° 37° не дают, однако они могут сенсибилизировать эритроциты и способствовать присоединению комплемента, что и приводит к лизису эритроцитов.

Группы крови системы Yt

Итон и Мортон (В. Eaton, J. Morton) с сотр. (1956) обнаружили у человека, к-рому многократно переливали кровь, антитела, способные выявлять очень широко распространенный антиген Yta. Позднее был открыт и второй антиген этой системы — Ytb. Антиген Yta — один из наиболее широко распространенных. Он встречается у 99,8% людей. Антиген Ytb встречается в 8,1% случаев. Различают три фенотипа этой системы: Yt(a + b-), Yt (а + b +) и Yt (а — b +). Лиц фенотипа Y t (а — b —) не найдено. Антигены Yta и Ytb передаются по наследству как доминантные признаки.

Группы крови системы Xg

Все групповые изоантигены, о которых до сих пор шла речь, не зависят от пола. Они с одинаковой частотой встречаются как у мужчин, так и у женщин. Однако Манн (J. Mann) и сотр. в 1962 г. установили, что имеются групповые антигены, наследственная передача которых происходит через половую хромосому X. Вновь открытый в эритроцитах людей антиген был обозначен Xg. Антитела к этому антигену были найдены у больного, страдавшего семейной телеангиэктазией. По случаю профузных носовых кровотечений этому пациенту многократно переливали кровь, что и явилось, по-видимому, причиной его изоиммунизации. В зависимости от наличия или отсутствия в эритроцитах антигена Xg все люди могут быть разделены на две группы: Xg(a+) и Xg(a—). У мужчин антиген Xg(a+) встречается в 62,9% случаев, а у женщин — в 89,4%. Было установлено, что если оба родителя относятся к группе Xg(a—), то и у их детей — как мальчиков, так и девочек — этого антигена не содержится. Если отец группы Xg(a+), а мать группы Xg(a—), все мальчики имеют группу Xg(a—), поскольку в этих случаях в яйцеклетку поступают сперматозоиды только с хромосомой Y, определяющей мужской пол ребенка. Антиген Xg является доминантным признаком, у новорожденных он хорошо развит. Благодаря использованию группового антигена Xg открылась возможность решения вопроса о происхождении некоторых заболеваний, связанных с полом (дефекты образования некоторых энзимов, заболевания с синдромами Клайнфелтера, Тернера и др.).

Редко встречающиеся группы крови

Наряду с широко распространенными описаны и довольно редко встречающиеся антигены. Напр., антиген Bua найден Андерсоном (С. Anderson) с сотр. в 1963 г. у 1 из 1000 обследованных, а антиген Вх — Дженкинсом (W. Jenkins) с сотр. в 1961 г. у 1 из 3000 обследованных. Описаны и еще более редко встречающиеся в эритроцитах человека антигены.

Методика определения групп крови

Методика определения групп крови— выявление в эритроцитах групповых антигенов при помощи стандартных сывороток, а для групп системы AB0 также и выявление агглютининов в сыворотке исследуемой крови при помощи стандартных эритроцитов.

Для определения какого-либо одного группового антигена используются сыворотки одной специфичности. Одновременное применение сывороток разной специфичности одной и той же системы дает возможность определить полную групповую принадлежность эритроцитов по этой системе. Напр., в системе Kell использование только сыворотки анти-К или только анти-k дает возможность установить, содержат ли исследуемые эритроциты фактор К или к. Использование обеих этих сывороток позволяет решить вопрос о принадлежности исследуемых эритроцитов к одной из трех групп этой системы: КК, Кк, kk.

Стандартные сыворотки для определения Г. к. готовят из крови людей, содержащей антитела — нормальные (системы AB0) или изоиммунные (системы Rh, Kell, Duffy, Kidd, Lutheran, антигенов S и s). Для определения групповых антигенов M, N, P и Le чаще всего получают гетероиммунные сыворотки.

Техника определения зависит от характера содержащихся в сыворотке антител, которые бывают полными (нормальные сыворотки системы AB0 и гетероиммунные) или неполными (подавляющее большинство изоиммунных) и проявляют свою активность в разных средах и при разной температуре, от чего зависит необходимость использования разной техники реакции. Метод использования каждой сыворотки указывается в сопроводительной инструкции. Конечный результат реакции при использовании любой техники выявляется в виде наличия или отсутствии агглютинации эритроцитов. При определении любого антигена в реакцию обязательно включаются положительные и отрицательные контроли.

Определение групп крови системы AB0

Необходимые реактивы: а) стандартные сыворотки групп 0αβ (I), Aβ (II), Bα(III), содержащие активные агглютинины, и группы АВ (IV)— контроль; б) стандартные эритроциты групп А (II) и В (III), обладающие хорошо выраженными агглютинабельными свойствами, и группы 0(1)— контроль.

Определение Г. к. системы AB0 производится реакцией агглютинации при комнатной температуре на фарфоровой или любой другой белой пластинке со смачиваемой поверхностью.

Для определения Г. к. системы AB0 существует два способа. 1. При помощи стандартных сывороток, позволяющих установить, какие групповые агглютиногены (А или В) находятся в эритроцитах исследуемой крови, и на основании этого сделать заключение о ее групповой принадлежности. 2. Одновременно при помощи стандартных сывороток и эритроцитов— перекрестный способ. При этом также определяется наличие или отсутствие групповых агглютиногенов и, кроме того, устанавливается наличие или отсутствие групповых агглютининов (а, 3), что в итоге дает полную групповую характеристику исследуемой крови.

При определении Г. к. системы AB0 у больных и других лиц, к-рым предполагается сделать переливание крови, достаточно первого способа. В особых случаях, напр, при затруднении в трактовке результата, а также при определении группы крови AB0 у доноров, пользуются вторым способом.

При определении Г. к. и первым и вторым способом необходимо применять по два образца (двух разных серий) стандартной сыворотки каждой группы, что является одной из мер, предупреждающих ошибки.

При первом способе кровь можно брать из пальца, мочки уха или пятки (у грудных детей) непосредственно перед определением. При втором (перекрестном) способе кровь берут предварительно из пальца или вены в пробирку и исследуют после свертывания, т. е. после разделения на сыворотку и эритроциты.

Первый способ (цветн. рис. 1). На пластинку у предварительно написанных обозначений наносят по 0,1 мл (по одной большой капле) стандартной сыворотки каждого образца так, что образуется два ряда капель в следующем порядке по горизонтали слева направо: 0αβ (I), Aβ (II) и Bα (III).

Исследуемую кровь наносят при помощи пипетки или конца стеклянной палочки по маленькой (приблизительно в 10 раз меньшей) капле рядом с каждой каплей сыворотки.

Кровь тщательно перемешивают с сывороткой сухой стеклянной (или пластмассовой) палочкой, после чего пластинку периодически покачивают, одновременно наблюдая за результатом, который выражается в наличии агглютинации (попожительная реакция) или отсутствии ее (отрицательная реакция) в каждой капле. Время наблюдения 5 мин. Для исключения неспецифичности результата по мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 мин., в каждую каплю, в к-рой наступила агглютинация, добавляют одну каплю изотонического р-ра хлорида натрия и продолжают наблюдения, покачивая пластинку в течение 5 мин. В тех случаях, когда агглютинация наступила во всех каплях, делают еще контрольное исследование, смешивая исследуемую кровь с сывороткой группы АВ (IV), к-рая не содержит агглютининов и не должна вызывать агглютинации эритроцитов.

Трактовка результата. 1. Если ни в одной из капель не произошло агглютинации, это значит, что исследуемая кровь не содержит групповых агглютиногенов, т. е. принадлежит к группе О (I). 2. Если сыворотка группы 0ар (I) и В а (III) вызвала агглютинацию эритроцитов, а сыворотка группы Ар (II) дала отрицательный результат, это значит, что исследуемая кровь содержит агглютиноген А, т. е. принадлежит к группе А (II). 3. Если сыворотка группы 0αβ (I) и Аβ (II) вызывала агглютинацию эритроцитов, а сыворотка группы Вα (III) дала отрицательный результат, это значит, что исследуемая кровь содержит агглютиноген В, т. е. принадлежит к группе В (III). 4. Если сыворотка всех трех групп вызвала агглютинацию эритроцитов, но в контрольной капле с сывороткой группы AB0 (IV) реакция отрицательная, это значит, что исследуемая кровь содержит оба агглютиногена — А и В, т. е. принадлежит к группе АВ (IV).

Второй (перекрестный) способ (цветн. рис. 2). На пластинку у предварительно надписанных обозначений, так же как при первом способе, наносят два ряда стандартных сывороток группы 0αβ (I), Аβ (II), Вα(III) и рядом с каждой каплей— исследуемую кровь (эритроциты). Кроме того, на нижнюю часть пластинки наносят в три точки по одной большой капле сыворотки исследуемой крови, а рядом с ними — по одной маленькой (приблизительно в 40 раз меньшей) капле стандартных эритроцитов в следующем порядке слева направо: группа 0(I), А (II) и В(III). Эритроциты группы 0(I) являются контролем, т. к. они не должны агглютинироваться никакой сывороткой.

Во всех каплях сыворотку тщательно размешивают с эритроцитами и затем наблюдают результат при покачивании пластинки в течение 5 мин.

Трактовка результата. При перекрестном способе сначала оценивается результат, который получился в каплях со стандартной сывороткой (два верхних ряда), так же как это делается при первом способе. Затем оценивается результат, полученный в нижнем ряду, т. е. в тех каплях, в которых исследуемая сыворотка смешана со стандартными эритроцитами, и, следовательно, в ней определяются антитела. 1. Если реакция со стандартными сыворотками указывает на принадлежность крови к группе 0 (I), а сыворотка исследуемой крови агглютинирует эритроциты группы А (II) и В (III) при отрицательной реакции с эритроцитами группы 0 (I), это указывает на наличие в исследуемой крови агглютининов а и 3, т. е. подтверждает принадлежность ее к группе 0αβ(I). 2. Если реакция со стандартными сыворотками указывает на принадлежность крови к группе А (II), сыворотка испытуемой крови агглютинирует эритроциты группы В (III) при отрицательной реакции с эритроцитами группы 0 (I) и А (II); это указывает на наличие в исследуемой крови агглютинина 3» т. е. подтверждает принадлежность ее к группе А 3 (1Г). 3. Если реакция со стандартными сыворотками указывает на принадлежность крови к группе В (III), а сыворотка исследуемой крови агглютинирует эритроциты группы А (II) при отрицательной реакции с эритроцитами группы 0 (I) и В (III), это указывает на наличие в исследуемой крови агглютинина а, т. е. подтверждает принадлежность ее к группе Вα (III). 4. Если реакция со стандартными сыворотками указывает на принадлежность крови к группе АВ (IV), а сыворотка дает отрицательный результат со стандартными эритроцитами всех трех групп, это указывает на отсутствие групповых агглютининов в исследуемой крови, т. е. подтверждает принадлежность ее к группе AB0 (IV).

Определение групп крови системы MNSs

Определение антигенов М и N производится гетероиммунными сыворотками, как и группы крови системы AB0, т. е. на белой пластинке при комнатной температуре. Для исследования двух других антигенов этой системы (S и s) используют изоиммунные сыворотки, дающие наиболее четкий результат в непрямой пробе Кумбса (см. Кумбса реакция). Иногда сыворотки анти-S содержат полные антитела, в этих случаях исследование рекомендуется проводить в солевой среде, аналогично определению резус-фактора. Сопоставление результатов определения всех четырех факторов системы MNSs дает возможность установить принадлежность исследуемых эритроцитов и одной из 9 групп этой системы: MNSS, MNSs, MNss, MMSS, MMSs, MMss, NNSS, NNSs, NNss.

Определение групп крови систем Kell, Duffy, Kidd, Lutheran

Определение этих групп крови производится непрямой пробой Кумбса. Иногда высокая активность антисывороток позволяет использовать для этой цели реакцию конглютинации с применением желатины аналогично определению резус-фактора (см. Конглютинация).

Определение групп крови систем P и Lewis

Факторы системы P и Lewis определяют в солевой среде в пробирках или на плоскости, причем для более четкого выявления антигенов системы Lewis применяется предварительная обработка исследуемых эритроцитов протеолитическим ферментом (папаин, трипсин, протелин).

Определение резус-фактора

Определение резус-фактора, имеющего наряду с группами системы AB0 наиболее важное значение для клин, медицины, производится различными способами в зависимости от характера антител в стандартной сыворотке (см. Резус-фактор).

Лейкоцитарные группы

Лейкоцитарные группы — деление людей на группы, обусловленные наличием в лейкоцитах антигенов, независимых от антигенов системы AB0, Rh и др.

Лейкоциты человека имеют сложное антигенное строение. Они содержат антигены системы AB0 и MN, однозначные с теми, которые находятся в эритроцитах того же индивидуума. Это положение основывается на выраженной способности лейкоцитов вызывать образование антител соответствующей специфичности, агглютинироваться групповыми изогемагглютинирующими сыворотками с высоким титром антител, а также специфически адсорбировать иммунные антитела анти-М и анти-N. Менее выражены в лейкоцитах факторы системы Rh и других антигенов эритроцитов.

Помимо указанной антигенной дифференцировки лейкоцитов, выделены особые лейкоцитарные группы.

Впервые сведения о лейкоцитарных группах получил франц. исследователь Ж. Доссе (1954). С помощью иммунной сыворотки, полученной от лиц, к-рым производили повторные многократные переливания крови, и содержащей противолейкоцитарные антитела агглютинирующего характера (лейкоагглютинирующие антитела), был выявлен антиген лейкоцитов, встречающийся у 50% среднеевропейского населения. Этот антиген вошел в литературу под названием «Мак». В 1959 г. Руд (J. Rood) и соавт, дополнили представления о лейкоцитарных антигенах. На основании анализа результатов исследования 60 иммунных сывороток с лейкоцитами 100 доноров авторы пришли к заключению о существовании других антигенов лейкоцитов, обозначенных 2,3, а также 4а, 4b; 5а, 5b; 6a, 6b. В 1964 г. Пэйн (R. Payne) с соавт, установила антигены LA1 и LA2.

Насчитывают более 40 антигенов лейкоцитов, которые могут быть отнесены к одной из трех условно выделенных категорий: 1) антигены главного локуса, или общие антигены лейкоцитов; 2) антигены гранулоцитов; 3) антигены лимфоцитов.

Наиболее обширную группу представляют антигены главного локуса (система HLA). Они являются общими для полиморфноядерных лейкоцитов, лимфоцитов, а также тромбоцитов. Согласно рекомендациям ВОЗ, используют буквенно-цифровое обозначение HLA (Human Leucocyte Antigen) для антигенов, существование которых подтверждено в ряде лабораторий при параллельных исследованиях. В отношении недавно открытых антигенов, существование которых нуждается в дальнейшем подтверждении, используют обозначение буквой w, к-рую вставляют между буквенным обозначением локуса и цифровым — аллеля.

Система HLA — наиболее сложная из всех известных систем антигенов. Генетически H LA-антигены принадлежат к четырем сублокусам (A,B,C,D), каждый из которых объединяет аллельные антигены (см. Иммуногенетика). Наиболее изученными являются сублокусы А и В.

К первому сублокусу относятся: HLA-A1, HLA-A2, HLA-A3, HLA-A9, HLA-A10, HLA-A11, HLA-A28, HLA-A29; HLA-Aw23, HLA-Aw24, HLA-Aw25, HLA-Aw26, HLA-Aw30„ HLA-Aw31, HLA-Aw32, HLA-Aw33, HLA-Aw34, HLA-Aw36, HLA-Aw43a.

Второму сублокусу принадлежат антигены: HLA-B5, HLA-B7, HLA-B8, HLA-B12, HLA-B13, HLA-B14, HLA-B18, HLA-B27; HLA-Bw15, HLA-Bw16, HLA-Bw17, HLA-Bw21, HLA-Bw22, HLA-Bw35, HLA-Bw37, HLA-Bw38, HLA-Bw39, HLA-Bw40, HLA-Bw41, HLA-Bw42a.

К третьему сублокусу причисляют антигены HLA-Cw1, HLA-Cw2, HLA-Cw3, HLA-Cw4, HLA-Cw5.

В четвертый сублокус входят антигены HLA-Dw1, HLA-Dw2, HLA-Dw3, HLA-Dw4, HLA-Dw5, HLA-Dw6. Последние два сублокуса недостаточно изучены.

По-видимому, не все антигены HLA даже первых двух сублокусов (А и В) известны, т. к. сумма генных частот по каждому сублокусу еще не приблизилась к единице.

Деление системы HLA на сублокусы представляет большой прогресс в области изучения генетики этих антигенов. Система HLA-антигенов контролируется генами, расположенными на С6 хромосоме, по одному в сублокусе. Каждый ген контролирует синтез одного антигена. Располагая диплоидным набором хромосом (см. Хромосомный набор), теоретически каждый индивидуум должен иметь 8 антигенов, практически при тканевом типировании пока определяют четыре HLA-антигена двух сублокусов — А и В. Фенотипически может встретиться несколько комбинаций HLA-антигенов. К первому варианту можно отнести случаи, когда аллельные антигены неоднозначны в пределах первого и второго сублокусов. Человек является гетерозиготным по антигенам обоих сублокусов. Фенотипически у него обнаруживаются четыре антигена — два антигена первого сублокуса и два антигена второго сублокуса.

Второй вариант представляет ситуацию, когда человек является гомозиготным по антигенам первого или второго сублокуса. Такой человек содержит одинаковые антигены первого или второго сублокуса. Фенотипически у него обнаруживаются только три антигена: один антиген первого сублокуса и два антигена второго сублокуса или, наоборот, один антиген второго сублокуса и два антигена — первого.

Третий вариант охватывает случай, когда человек гомозиготен по обоим сублокусам. В этом случае фенотипически определяются только два антигена, по одному каждого сублокуса.

Наиболее частый — первый вариант генотипа (см.). Реже в популяции встречается второй вариант генотипа. Чрезвычайно редким является третий вариант генотипа.

Подразделение HLA-антигенов на сублокусы позволяет предсказать возможные варианты наследования этих антигенов от родителей к детям.

Генотип HLA-антигенов детей определяется ran лотипом, т. е. сцепленными антигенами, контролируемыми генами, расположенными на одной хромосоме, к-рую они получают от каждого из родителей. Поэтому половина антигенов HLA у ребенка всегда одинакова с каждым из родителей.

Учитывая сказанное, легко представить четыре возможных варианта наследования антигенов лейкоцитов системы HLA сублокусов А и В. Теоретически совпадение HLA-анти-генов среди братьев и сестер в семье составляет 25%.

Важным показателем, характеризующим каждый антиген HLA-системы, является не только его расположение на хромосоме, но и частота его встречаемости в популяции, или популяционное распределение, имеющее расовые особенности. Частота встречаемости антигена определяется генной частотой, к-рая представляет часть от общего числа исследованных особей, выраженную в долях единицы, с к-рой встречается каждый антиген. Генная частота антигенов H LA-системы является постоянной величиной для определенной этнической группы населения. По данным Ж. Доссе с соавт., генная частота для франц. населения составляет: HLA-A1—0,141, HLA-A2—0,256, HLA-A3—0,131, HLA-A9—0,247, HLA-B5—0,143, HLA-B7—0,224, HLA-B8—0,156. Сходные показатели генных частот H LA-антигенов установлены Ю. М. Зарецкой и В. С. Федруновой (1971) для русского населения. С помощью посемейных исследований различных популяционных групп земного шара удалось установить различие в частоте встречающихся гаплотипов. Особенности в частоте HLA-гаплотипов объясняются различием популяционного распределения антигенов этой системы у различных рас.

Большое значение для практической и теоретической медицины представляет определение количества возможных HLA-гаплотипов и фенотипов в смешанной популяции людей. Число возможных гаплотипов зависит от количества антигенов в каждом сублокусе и равно их произведению: число антигенов первого сублокуса (А) X число антигенов второго сублокуса (В) = количество гаплотипов, или 19 X 20 = 380.

Расчеты указывают на то, что среди примерно 400 чел. можно обнаружить только двух людей, имеющих сходство по двум H LA-антигенам сублокусов А и В.

Число возможных сочетаний антигенов, определяющих фенотип, вычисляют отдельно для каждого сублокуса. Расчет производят по формуле для определения числа сочетания по два (для гетерозиготных особей) и по одному (для гомозиготных особей) в сублокусе [Менцель и Рихтер (G. Menzel, К. Richter), n(n+1)/2 , где n — число антигенов в сублокусе.

Для первого сублокуса число антигенов равно 19, для второго —20.

Число возможных комбинаций антигенов в первом сублокусе— 190; во втором—210. Число возможных фенотипов для антигенов первого и второго сублокуса равно 190 X 210 = =39 900. Т. е. на 40 000 примерно только в одном случае можно встретить двух неродственных людей с одинаковым фенотипом по H LA-антигенам первого и второго сублокусов. Количество H LA-фенотипов значительно возрастет, когда будет известно число антигенов в сублокусе С и сублокусе D.

Антигены HLA являются универсальной системой. Они обнаружены, помимо лейкоцитов и тромбоцитов, также в клетках различных органов и тканей (коже, печени, почках, селезенке, мышцах и др.).

Выявление большинства антигенов системы HLA (локусы А,В,С) производится с помощью серол, реакций: лимфоцитотоксической пробы, РСК в отношении лимфоцитов или тромбоцитов (см. Реакция связывания комплемента). Иммунные сыворотки, преимущественно лимфоцитотоксического характера, получают от лиц, сенсибилизированных во время многократных беременностей, трансплантацией аллогенной ткани или путем искусственной иммунизации в результате повторных инъекций лейкоцитов с известным HLA-феноти-пом. Идентификация H LA-антигенов локуса D производится при помощи смешанной культуры лимфоцитов.

HLA-система имеет большое значение в клин, медицине и особенно при аллогенной трансплантации тканей, поскольку несоответствие донора и реципиента по этим антигенам сопровождается развитием реакции тканевой несовместимости (см. Несовместимость иммунологическая). В этой связи представляется вполне оправданным осуществление тканевого типирования при подборе для трансплантации донора со сходным H LA-фенотипом.

Кроме того, различие матери и плода по антигенам H LA-системы при повторных беременностях обусловливает образование антилейкоцитарных антител, которые могут приводить к выкидышу или гибели плода.

HLA-антигены имеют значение также при переливании крови, в частности лейкоцитов и тромбоцитов.

Другой системой антигенов лейкоцитов, независимой от HLA, являются антигены гранулоцитов. Эта система антигенов является тканеспецифической. Она характерна для клеток миелоидного ряда. Антигены гранулоцитов обнаружены в полиморфно-ядерных лейкоцитах, а также клетках костного мозга; они отсутствуют в эритроцитах, лимфоцитах и тромбоцитах.

Известно три гранулоцитарных антигена: NA-1, NA-2, NB-1.

Идентификация системы гранулоцитарных антигенов осуществляется с помощью изоиммунных сывороток агглютинирующего характера, которые могут быть получены от повторно беременных женщин или лиц, подвергавшихся многократным переливаниям крови.

Установлено, что антитела против антигенов гранулоцитов имеют значение при беременности, вызывая кратковременные нейтропении новорожденных. Антигены гранулоцитов играют также важную роль в развитии негемолитических трансфузионных реакций.

Третью категорию антигенов лейкоцитов составляют лимфоцитарные антигены, присущие только клеткам лимфоидной ткани. Известен один антиген из этой категории, получивший обозначение LyD1. Он встречается у людей с частотой ок. 36%. Идентификация антигена производится с помощью РСК иммунными сыворотками, полученными от сенсибилизированных лиц, подвергавшихся многократным переливаниям крови или имевших повторные беременности. Значение этой категории антигенов в трансфузиологии и трансплантологии остается малоизученным.

Группы сывороточных белков

Белки сыворотки крови имеют групповую дифференциацию. Открыты групповые свойства многих сывороточных белков крови. Исследование группы сывороточных белков находит широкое применение в судебной медицине, антропологии и, по мнению многих исследователей, имеет значение для переливания крови. Группы сывороточных белков независимы от серол, систем эритроцитов и лейкоцитов, они не связаны с полом, возрастом и передаются по наследству, что позволяет использовать их в суд.-мед. практике.

Известны группы следующих сывороточных белков: альбумина, постальбумина, альфа1-глобулина (альфа1-антитрипсина), альфа2-глобулина, бета1-глобулина, липопротеида, иммуноглобулина. Большинство групп сывороточных белков выявляется с помощью электрофореза в гидролизованном крахмале, полиакриламидном геле, агаре или на ацетат-целлюлозе, группа альфа2-глобулина (Gc) определяется методом иммуноэлектрофореза (см.), липопротеиды — методом преципитации в агаре; групповая специфичность белков, относящихся к иммуноглобулинам, определяется иммунол, методом — реакцией задержки агглютинации при помощи вспомогательной системы: Rh-положительные эритроциты, сенсибилизированные сыворотками антирезус с неполными антителами, содержащими тот или иной групповой антиген системы Gm.

Иммуноглобулины. Наибольшее значение среди групп сывороточных белков имеет генетическая неоднородность иммуноглобулинов (см.), связанная с существованием наследуемых вариантов этих белков — так наз. аллотипов, различающихся по антигенным свойствам. Она наиболее важна в практике переливания крови, судебной медицине и др.

Известны две основные системы аллотипических вариантов иммуноглобулинов: Gm и Inv. Характерные признаки антигенного строения IgG определяются системой Gm (антигенными детерминантами, локализующимися в С-концевой половине тяжелых гамма-цепей). Вторая система иммуноглобулинов Inv обусловлена антигенными детерминантами легких цепей и поэтому характеризует все классы иммуноглобулинов. Антигены системы Gm и системы Inv определяют методом задержки агглютинации.

Система Gm насчитывает более 20 антигенов (аллотипов), которые обозначаются цифрами — Gm(1), Gm(2) и т. д., либо буквами — Gm (а), Gm(x) и т. д. Система Inv имеет три антигена — Inv(1), Inv(2), Inv(3).

Отсутствие того или иного антигена обозначается знаком «—» [напр., Gm(1, 2-, 4)].

Антигены иммуноглобулиновых систем у лиц различных национальностей встречаются с неодинаковой частотой. Среди русского населения антиген Gm(1) встречается в 39,72% случаев (М. А. Умнова и др., 1963). У многих национальностей, населяющих Африку, этот антиген содержится в 100% случаев.

Изучение аллотипических вариантов иммуноглобулинов важно для клиники, генетики, антропологии и широко используется для расшифровки структуры иммуноглобулинов. В случаях агаммаглобулинемии (см.), как правило, антигены системы Gm не открываются.

При патологии, сопровождающейся глубокими белковыми сдвигами в крови, встречаются такие комбинации антигенов системы Gm, которые отсутствуют у здоровых лиц. Некоторые патол, изменения белков крови могут как бы маскировать антигены системы Gm.

Альбумины (Аl). Полиморфизм альбуминов у взрослых людей встречается крайне редко. Отмечена двойная полоса альбуминов — альбумины, обладающие большей подвижностью при электрофорезе (AlF) и более медленной подвижностью (Als ). См. также Альбумины.

Постальбумины (Ра). Различают три группы: Ра 1-1, Ра 2-1 и Ра 2-2.

альфа1-Глобулины. В области альфа1-глобулинов отмечается большой полиморфизм альфа1-антитрипсина (альфа1-АТ-глобулин), получивший обозначение системы Pi (протеаза-ингибитор). Выявлены 17 фенотипов данной системы: PiF, PiJ, PiM, Pip, Pis,Piv,Piw, Pix ,Piz и др.

При определенных условиях электрофореза альфа1-глобулины обладают большой электрофоретической подвижностью и располагаются на электрофореграмме впереди альбуминов, поэтому некоторые авторы называют их преальбуминами.

альфаг-Антитрипсин относится к гликопротеидам. Он ингибирует активность трипсина и других протеолитических ферментов. Физиол, роль альфа-1-антитрипсина не установлена, однако отмечено повышение его уровня при некоторых физиол, состояниях и патол, процессах, напр, при беременности, после приема противозачаточных средств, при воспалении. Низкую концентрацию альфа-1-антитрипсина связывают с аллелем Piz и Pis . Отмечают связь недостаточности альфа-1-антитрипсина с хрон, обтурационными легочными заболеваниями. Этими заболеваниями чаще страдают люди, гомозиготные по аллелю Pi2 или гетерозиготные по аллелям Pi2 и Pis .

С недостаточностью альфа1-антитрипсина связывают и особую форму эмфиземы легких, передающуюся по наследству.

α2-Глобулины. В этой области различают полиморфизм гаптоглобина, церулоплазмина и группоспецифического компонента.

Гаптоглобин (Нр) обладает способностью активно вступать в соединение с гемоглобином, растворенным в сыворотке, и образовывать комплекс Hb—Нр. Считают, что молекула последнего в силу больших размеров не проходит через почки и, т. о., гаптоглобин сохраняет гемоглобин в организме. В этом усматривается его основная физиол, функция (см. Гаптоглобин). Предполагают, что фермент гемальфаметилоксигеназа, расщепляющий протопорфириновое кольцо по α-метиленовому мостику, действует в основном не на гемоглобин, а на комплекс Hb-Hp, т. е. обычный обмен гемоглобина включает в себя его соединение с Hp.

Определение содержания гаптоглобина в сыворотке крови имеет значение для ранней диагностики некоторых хрон, заболеваний, для выяснения причины анемий, для выяснения прогноза и для установления эффективности их лечения.

Определение группы крови

В 1901 году выдающийся ученый Карл Ландштейнер открыл группы крови и заложил основы современной трансфузиологии. Исследователь выявил три группы на основании различных вариантов реакции агглютинации эритроцитов и сывороток крови. Материал для исследования был взят у сотрудников собственной лаборатории. Ученики Ландштейнера Декастелло и Стюрли несколькими годами позже открыли четвертую группу, но посчитали ее сомнительной и исключили из результатов исследований. В 1906 году психиатр из Праги Ян Янский подтвердил существование группы AB (IV). Публикация исследования в местном издании оказалась практически незамеченной. В 1910 году после повторного обнаружения четвертой группы Моссом Ян Янский был вынужден доказывать первенство открытия. Чешский ученый предложил цифровое обозначение групп крови: I, II, III, IV.

В трансфузиологии группами крови называют различные сочетания антигенов эритроцитов. Антигены являются генетическими признаками: наследуются от родителей и остаются неизменными на протяжении жизни. В 1980 году Международное сообщество переливания крови разработало числовую терминологию для антигенов эритроцитов. Выделены 23 системы группы крови, включающие 194 антигена. Нумерация в большинстве случаев соответствует порядку обнаружения. Входящие в каждую из 23 систем антигены кодируются шестизначным номером: первые три цифры являются номером системы, оставшиеся три – указывают на специфичность антигена внутри системы.

№ системы Наименование Обозначение Наименование генов Хромосомная локализация
001 AB0 AB0 AB0 9q34.1—q34.2
002 MNS MNS GYPA, GYPB, GYPE 4q28—q31
003 P P1 P1 22q11.2—qter
004 Rh RH RHD, RHCE 1p36.2—p34
005 Lutheran LU LU 19q12—q13
006 Kell KEL KEL 7q33
007 Lewis LE FUT3 19p33
008 Duffy FY FY 1q22—q23
009 Kidd JK JK 18q11—q12
010 Diego DI AE1 17q12—q21
011 Yt YT ACHE 7q22
012 Xg XG XG Xp22.32
013 Scianna SC SC 1p36.2—p22
014 Dombrock DO DO неизвестна
015 Colton CO AQP1 7p14
016 Landsteiner-Wiener LW LW 19p13.2—cen
017 Chido/Rogers CH/RG C4A, C4B 6p21.3
018 Hh H FUT1 19q13
019 Kx XK XK Xp21.1
020 Gerbich GE GYPC 2q14—q21
021 Cromer CROM DAF 1q32
022 Knops KN CR1 1q32
023 Indian IN CD44 11p13

Система группы крови AB0

Групповая принадлежность по системе AB0

Агглютиногены Агглютинины
α и β
A β
B α
AB нет
  • 0(I): антигены A и B отсутствуют, антитела α и β – обнаружены (35 — 40 % населения в мире);
  • A(II): присутствует антиген A и антитела β (35 %);
  • B(III): обнаружен агглютиноген B и агглютинин α (15 – 20 %);
  • AB(IV): наличие агглютиногенов A и B, отсутствие агглютининов α и β (5 – 10 %).

По мере движения с запада на восток Евразии частота обнаружения антигена A падает, а антигена B возрастает. Антиген 0 редко встречается в Азии, но имеет широкое распространение у коренных народов Южной Америки, Полинезии и Австралии. Причина – эпидемии инфекционных заболеваний.

Результат типирования крови записывают в историю болезни или в карту донора. Врач-трансфузиолог указывает дату и ставит подпись.

В отдельных случаях во время типирования наблюдается слабовыраженная агглютинация эритроцитов. Недостаточно выраженная реакция объясняется наличием слабых вариантов антигенов A и B. Наибольшее клиническое значение представляют подгруппы A1 и A2. Впервые слабые варианты были обнаружены в 1911 году учеными Dungern и Hirszeld. Позднее в 1930 году Landsteiner и Levine предложили названия подгруппы – A1 и A2. A2 встречается до 20 % в группе A и до 35 % в группе AB. Сыворотка лиц из образцов крови A2 может содержать анти-A1-антитела: в 2 % случаев в группе A2 и в 30 % в A2B. Антитела анти-A1 представляют опасность ввиду агглютинации эритроцитов группы A.

Методика определения групп крови A2 и A2B

Частота выявления эритроцитов A2 существенно варьируется в зависимости от применяемых реагентов. Приводим сравнение результатов исследования при использовании различных методик определения групп крови A2 и A2B.

  • Анти-A1 (лектин, фитогемагглютинин). Диагностикум явно выраженно (на +++/++++) агглютинирует A1 эритроциты сразу после смешения с образцом. Не агглютинирует A2 или вызывает мелкую агглютинацию на пятой минуте и позднее.
  • Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки.
  • Цоликлоны анти-A и анти-AB.
  • Цоликлон анти-A слабый.
Число проанализированных образцов Группа крови A (II) Группа крови AB (IV)
Число проанализированных образцов Группа A2 (II) в % Число проанализированных образцов Группа A2B (IV) в %
Анти-A1 (лектин, фитогемагглютинин) 1592 14,7 357 23,5
Цоликлоны: анти-A, анти-AB 3599 2,1* 357 7,03*
Цоликлон анти-А — слабый 3587 4,5* 357 11,2*
Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки 1592 17,4 344 34,2

Примечание: * — агглютинация выражена слабо, присутствуют мелкие агглютинаты на розовом фоне.

Наибольшую точность исследования обеспечивает Анти-A1 (лектин, фитогемагглютинин). Тест рекомендован для выявления подгрупп антигена A у детей младше двух лет. Причина – физиологическая незрелость эритроцитов новорожденных, влекущая ошибочные результаты исследования со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками.

В 1930 году Landsteiner и Levine обнаружили подтип Aint: промежуточный вариант между A1 и A2. Данный антиген характерен для негроидов и достигает 8,5 % у лиц с группой крови A. У европеоидов Aint наблюдался лишь у 1 % людей со второй группой крови. В крайне редких случаях у человека отсутствуют все антигены системы AB0. Фенотип «Бомбей» обусловлен генотипом hh. При отсутствии антигена H у лиц данной категории обнаруживаются анти-A и анти-B антитела.

Методика определения групп крови

Алгоритм определения группы крови гемагглютинирующими сыворотоками

Для определения группы крови AB0 прямым методом используют две серии стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Подготовьте две серии сывороток трех групп с титром 1:32 или выше. Для забора каждой сыворотки используйте отдельную маркированную пипетку. Подготовьте сыворотку AB(IV) для контроля.

  1. Обеспечьте хорошее освещение и температуру воздуха 18 – 25 °C.
  2. Промаркируйте планшет: 0(I) – слева, A(II) – по центру, B(III) – справа. Вверху по центру укажите фамилию донора или номер анализируемой крови.
  3. Нанесите в лунки 1 – 2 капли (приблизительно 0,1 мл) сывороток в два ряда в соответствии с маркировкой планшета.
  4. Пипеткой или стеклянной палочкой поместите по одной маленькой капле исследуемых эритроцитов рядом с каплями сыворотки. Объем сыворотки должен примерно в 10 раз превышать объем эритроцитосодержащей жидкости.
  5. Перемешайте капли в лунках палочкой.
  6. Для ускорения реакции произведите легкое покачивание планшета.
  7. Спустя три минуты в лунки планшета, в которых началась агглютинация, добавьте по одной капле NaCl. Подождите еще две минуты.
  8. Спустя пять минут оцените результаты реакции в проходящем сете. В случае невыраженной агглютинации добавьте еще по одной капле NaCl.
  • Отрицательная реакция в трех лунках свидетельствует об отсутствии антигенов на эритроцитах исследуемого образца. Кровь относится к группе 0(I).
  • Агглютинация в лунках с сыворотками 0(I) и B(III) говорит о наличии агглютиногена A и принадлежности к группе A(II).
  • Наступление реакции с сыворотками 0(I) и A(II) свидетельствует о присутствии антигена B и групповой принадлежности B(III).
  • Результаты реакции во всех лунках указывают на присутствие агглютиногенов A и B и соответствуют четвертой группе AB(IV).

В последнем случае следует удостовериться в отсутствии неспецифической реакции: нанесите на планшет 2 – 3 капли соответствующей группе AB(IV) сыворотки и добавьте одну каплю анализируемых эритроцитов. Перемешайте жидкости и оцените результат спустя пять минут. Отсутствие агглютинации свидетельствует о принадлежности к группе AB(IV), наличие – признак неспецифической реакции. В этом случае, а также при слабовыраженной агглютинации повторите исследование с другими сериями сывороток.

Техника определения группы крови цоликлонами

Моноклональные антитела к антигенам эритроцитов пришли на смену изогемагглютинирующих сывороток. Для каждого типирования достаточно одной серии реагентов анти-A, анти-B, анти-AB. Внедрение моноклональных реагентов позволило значительно упростить и стандартизировать методику определения группы крови AB0. Приводим краткое пошаговое руководство проведения исследования на планшете.

  1. Обеспечьте хорошее освещение. Работайте при комнатной температуре воздуха.
  2. Объект исследования – эритроцитосодержащие среды.
  3. Промаркируйте лунки планшета: анти-A, анти-B, анти-AB или используйте планшет с маркированной наклейкой.
  4. Нанесите примерно по 0,1 мл соответствующего моноклонального реагента в каждую из трех подписанных лунок.
  5. Добавьте приблизительно по 0,03 мл анализируемых эритроцитов рядом с каждой каплей диагностикума.
  6. Смешайте реагент с эритроцитами в лунках отдельными индивидуальными стеклянными палочками.
  7. Покачивайте планшет около трех минут.
  8. Проверьте наличие агглютинации в лунках.

Обычно реакция обнаруживается уже в первые секунды после смешивания. При этом слабые варианты антигенов A и B могут давать более позднюю агглютинацию.

Определение группы крови непрямым методом: алгоритм действий

Методика определения группы крови основана на взаимодействии эритроцитов от предварительно типированных лиц групп 0, A, B или смеси эритроцитов от нескольких одногруппных доноров с изогемагглютининами α и β в исследуемой сыворотке.

При работе с каждым типирующим реагентом используйте сухие чистые пипетки. Промывание палочек для перемешивания и пипеток осуществляйте в 0,9 % растворе NaCl.

  • Подготовьте пластину или планшет. Обеспечьте хорошее освещение помещения.
  • Выполните забор 3 – 5 мл крови без стабилизатора в пробирку. Дайте сыворотке отстояться 1,5 – 2 часа при комнатной температуре.
  • Отмойте тест-эритроциты в 0,9 % физиологическом растворе. Подготовьте 5 % взвесь.
  • Промаркируйте секции на планшете: 0(I), A(II), B(III).
  • Поместите по 2 капли (приблизительно 0,1 мл) анализируемой плазмы в каждую из трех лунок.
  • Добавьте в лунки примерно по 0,03 мл тест-эритроцитов.
  • Отдельными палочками смешайте типированные эритроциты с сывороткой.
  • Аккуратно покачивайте планшет в течение 5 минут.
  • Проведите визуальную оценку результатов реакции агглютинации в проходящем свете.

Заключение о групповой принадлежности

Результаты анализа плазмы со стандартными эритроцитами Групповая принадлежность
0(I) A(II) B(III)
+ + 0(I)
+ A(II)
+ B(III)
AB(IV)

+ — наличие агглютинации, — — отрицательный результат реакции.

  • 0(I): реакция в лунках A(II), B(III) (обнаружены антитела α и β).
  • A(II): агглютинация с эритроцитами B(III) (выявлены агглютинины β).
  • B(III): агглютинация в лунке A(II) (определены агглютинины α).
  • AB(IV): отсутствие результатов реакции во всех лунках (антитела в плазме не обнаружены).

Система Резус

Levine и Stetson обнаружили антигены системы Резус в 1939 году. Ученые изучали причины развития гемолитических реакций у рожениц при трансфузиях женщинам идентичных по системам AB0, MN и P. эритроцитов мужей. Годом позже Landsteiner и Wiener продуцировали выработку антител посредством иммунизации кроликов эритроцитами обезьян макака-резус. Антитела получили название анти-RH антитела. Полученные агглютинины вступали в реакцию агглютинации с эритроцитами макак-резус и с эритроцитами 85 % граждан Нью-Йорка белой расы. Вызвавший образование антител антиген получил название RH-фактор (D-фактор).

В редких случаях эритроциты людей не содержат ни одного антигена резус. Фенотип обозначают Rhnull. Ген Xro в этом случае представлен в гомозиготной форме и подавляет продуцирование всех антигенов. Обладатели фенотипа Rhnull не проявляют агглютиногеной активности, но имеют возможность передавать антигены по наследству.

Среди европейцев частота резус-положительных по антигену D лиц составляет 85 %. На мембране красных кровяных телец обычно расположено около 10 000 – 30 000 молекул D. При этом существуют два особых типа D-положительных лиц: D u (слабый) и D partial (частичный). Иммунная система D u и D partial способна вырабатывать анти-D-антитела.

Слабый антиген встречается у 1,5 % резус-положительных лиц и характеризуется низким числом (100 – 500) молекул D на мембране. Является иммуногенным для резус-отрицательных лиц. При этом переливание D-положительных эритроцитов больным со слабым D может вызвать сенсибилизацию кровяных телец донора. Эритроциты с D u слабо агглютинируются или совсем не вступают в прямую реакцию агглютинации с полными анти-резус антителами. Определение резус-принадлежности производят в непрямом антиглобулиновом тесте. Носителей D u считают резус-положительными донорами и резус-отрицательными реципиентами.

Частичный D имеет дефицит одного или нескольких эпитопов белковой молекулы. Иммунная система людей с D partial способна продуцировать антитела к недостающим эпитопам. Среди носителей частичного антигена выделяют семь групп лиц. Наибольшее клиническое значение имеет носительство D VI (присутствует только эпитоп Z): обладатели данной категории продуцируют антитела к неизмененному антигену и к частичным антигенам D I – D V , D VII . Техника определения резус-фактора D VI заключается в последовательном применении двух диагностикумов: моноклональных IgM анти-D-антител (цоликлона Анти-D-Супер или Анти-D IgM) и поликлональных или моноклональных IgG антител анти-D (стандартного универсального реагента или цоликлона Анти-D). Отрицательный результат реакции на первом и положительный результат на втором этапе исследования свидетельствует об обнаружении D VI . Обычно категории D VI соответствует генотип CcDee. Беременным женщинам с D VI при вынашивании плода с полным D назначают антирезусный иммуноглобулин.

Антитела против антигенов резус являются иммунными. Возникают вследствие изосенсибилизации. Специфичность определяется спровоцировавшими образование антител антигенами. Выделяют полные и неполные антитела.

Полные являются IgM антителами. Отличаются большим молекулярным весом, обнаруживаются реже по сравнению с неполными антителами. Способны агглютинировать резус-положительные эритроциты. Имеют меньшее значение при трансфузиях.

Неполные преимущественно относятся к классу IgG. Закрепляются на поверхности резус-положительных эритроцитов без образования агглютинатов. Склеивание кровяных телец осуществляется при наличии коллоидных растворов и протеолитических ферментов или после обработки антиглобулиновой сывороткой. Обладают меньшим в сравнении с полными антителами молекулярным весом. Способны проходить через плаценту. Во время сенсибилизации сперва продуцируются полные антитела, далее в большей мере вырабатываются неполные (иммуноглобулины IgG) антитела.

Техника определения резус-фактора с использованием цоликлона Анти-D-Супер

Цоликлон Анти-D-Супер — это полные анти-D IgM антитела человека. Для получения достоверных результатов анализируемый образец должен содержать достаточное количество эритроцитов.

  1. Обеспечьте хорошее освещение и комнатную температуру воздуха в помещении.
  2. Поместите одну большую каплю (приблизительно 0,1 мл) Анти-D IgM на пластину.
  3. Рядом расположите одну маленькую каплю (примерно 0,03 мл) исследуемых эритроцитов.
  4. Перемешайте две капли стерильной палочкой.
  5. Спустя 10 – 15 секунд плавно покачивайте пластинку на протяжении 20 – 30 секунд.
  6. Проверьте наличие агглютинации спустя три минуты после перемешивания.

В случае наступления реакции кровь оценивается как резус-положительная (Rh+), при отсутствии реакции – как резус-отрицательная (Rh-). При отрицательной либо слабо выраженной агглютинации необходимо повторно провести исследование с неполными анти-D IgG антителами с целью выявления слабого или частичного антигена D.

Методика определения резус-фактора D u в пробирочном тесте

Параллельно с анализом выполняют постановку трех контрольных проб: реагента цоликлон Анти-D (анти-D IgG) со стандартными резус-положительными и резус-отрицательными эритроцитами, анализируемых эритроцитов с раствором желатина без диагностикума анти-D IgG.

  1. Поместите в пробирку 0,05 – 0,1 мл (одну каплю) эритроцитов из сгустка свернувшейся крови или отмытых от консерванта.
  2. Добавьте 0,1 мл (две капли) подогретого до разжижения при 45 – 50 °C 10 % желатина.
  3. Добавьте одну каплю цоликлона Анти-D (анти-D IgG).
  4. Выполните перемешивание.
  5. Инкубируйте пробирку на водяной бане 10 – 15 минут или в термостате при 48 °C на протяжении получаса.
  6. Добавьте 5 – 6 мл изотонического раствора.
  7. Переверните пробирку 1 – 2 раза.
  8. Оцените наличие агглютинации в проходящем свете.

Отсутствие результатов реакции с анти-D IgM и выраженная агглютинация с анти-D IgG свидетельствуют об обнаружении слабых форм антигена D. При слабо выраженной агглютинации следует повторить исследование в непрямой пробе Кумбса.

Определение резус-принадлежности стандартным универсальным реагентом

Стандартный реагент антирезус RhD содержит поликлональные неполные анти-D-антитела. Параллельно с анализом образца осуществляется контрольное исследование реагента RhD со стандартными резус-положительными (одногруппными или группы 0) и резус-отрицательными (одногруппными) эритроцитами.

  1. Поместите на дно пробирки одну каплю диагностикума RhD.
  2. Добавьте одну каплю анализируемых эритроцитов.
  3. Несколько раз встряхните пробирку.
  4. Наклоните пробирку практически до горизонтального положения и медленно поворачивайте не менее 3 минут. Растекание содержимого по стенкам обеспечит более выраженный результат реакции. Обычно агглютинация наступает в первые 60 секунд. Запас времени необходим для выявления слабого антигена D u .
  5. Добавьте 2 – 3 мл изотонического раствора NaCl и 2 – 3 раза переверните пробирку без взбалтывания.
  6. Визуально оцените наличие агглютинации. Явно выраженные хлопья на фоне прозрачного раствора свидетельствуют о наличии антигена D. Равномерно окрашенная жидкость говорит об отсутствии антигена.

Результат считается достоверным только после проверки контрольных образцов: наступлении реакции со стандартными резус-положительными и отсутствии реакции – с резус-отрицательными эритроцитами.

Информацию о пошаговой постановке непрямого теста Кумбса с использованием неполных анти-D-антител читайте в разделе сайта «Реакция Кумбса».

Читайте также:  Вывих нижней челюсти - причины, симптомы, диагностика и лечение

Оставьте комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.